Пентасахариди та фармацевтична композиція що їх містить

1 Пентасахарид у формі кислоти або и фармацевтично прийнятної солі, аніонна форма якого має формулу 'fit so, н D Б г а , (О у якій R - гідроген або -SO3, (Сі-Сз)алкільна або (СгСз)ацильна група, Т - гідроген або етильна група, п=1 або 2 2 Пентасахарид за п 1, який відрізняється тим, що має форму натрієвої або калієвої солі 3 Пентасахарид за п 1 або п 2, який відрізняється тим, що його вибрано з групи сполук, яку утворюють натрієва сіль метил О-(2,3,4-три-О-метил-6-Осульфо-а -О-глюкопіранозил)-(і -> 4)-О-(2,6анпдро-5-С-карбокси-З-О-метил- р -Dманопіранозил-(і -> 4)-О-(2,3,6-три-О-сульфо-а О-глюкопіранозил)-(і -> 4)-О-{2,6'-анпдро-3-Ометил-а -L-ідопіранозилуронова кислота)-(1 -> Л)2,3,6-три-О-сульфо- а -D-глюкопіранозиду, натрієва сіль метил О-(2,3,4-три-О-метил-6-Осульфо-а -О-глюкопіранозил)-(і -> 4)-О-(5-С-етил2,3-ди-О-метил- р -D-глюкопіранозилуронова кислота)- (1 -> 4)-О-(2,3,6-три-О-сульфо- a -D глюкопіранозил)-(1 ^)-О-(2,6-анпдро-5-Скарбокси-3-О-метил- р-О-манопіранозил)-(і -> Л)2,3,6-три-О-сульфо- а -D-глюкопіранозиду, натрієва сіль метил О-(2,3,4-три-О-метил-6-Осульфо-а -О-глюкопіранозил)-(і -> 4)-О-(2,3-ди-Ометил-р-О-глюкопіранозилуронова кислота)(1^4)-О-(2,3,6-три-О-сульфо-а-0глюкопіранозил)-(і -> 4)-О-(2,6-анпдро-5-Скарбокси-3-О-метил- р-О-манопіранозил)-(і -> Л)2-О-сульфо-3,6-ди-О-метил- а -D-глюкопіранозиду, натрієва сіль метил О-(2,3,4-три-О-метил-6-Осульфо-а -О-глюкопіранозил)-(і -> 4)-О-(2,3-ди-Ометил-р-О-глюкопіранозилуронова кислота)(і^4)-О-(2,3,6-трі-О-сульфо-а-0глюкопіранозил)-(і -> 4)-О-(2,6-анпдро-5-Скарбокси-3-О-метил- р -D-манопіранозил)- (1 -> Л)2,3-ди-О-сульфо-6-О-метил- а -D-глюкопіранозиду, натрієва сіль метил О-(2,3,4-три-О-метил-6-Осульфо-а -О-глюкопіранозил)-(і -> 4)-О-(2,3-ди-Ометил-р -D-глюкопіранозилуронова кислота)(1 -» 4)-О-(2,3,6-три-О-сульфо-а -Dглюкопіранозил)-(і -> 4)-О-(2,6-анпдро-5-Скарбокси-3-О-метил- р -D-манопіранозил)- -2,6-диО-сульфо-3-О-метил- а -D-глюкопіранозиду і натрієва сіль метил О-(2,3,4-три-О-метил-6-Осульфо-а -О-глюкопіранозил)-(і -> 4)-О-(2,3-ди-Ометил-р-О-глюкопіранозилуронова кислота)(1^4)-О-(2,3,6-три-О-сульфо-а-0глюкопіранозил)-(і -> 4)-О-(2,7-анпдро-5-Скарбокси-6-деокси-З-О-метил- р -Dманогептопіранозил)-(і -> 4)-2,3,6-три-О-сульфоа -D-глюкопіранозиду 4 Фармацевтична композиція, яка містить як активний агент пентасахарид за будь-яким з пп 1-3, у формі солі з фармацевтично прийнятною основою або у формі кислоти у сполученні або у суміші з фармацевтично прийнятним нетоксичним наповнювачем 5 Фармацевтична композиція за п 4, яка відрізня О (О 61124 ється тим, що має форму одиничних доз, у яких активний агент змішано з щонайменше одним фармацевтичним наповнювачем 6 Фармацевтична композиція за п 5, яка відрізняється тим, що одинична доза містить від 0,1 мг до ЮОмг активного агента 7 Фармацевтична композиція за п 6, яка відрізняється тим, що одинична доза містить від 0,5мг до 50мг активного агента 8 Пентасахарид визначений у пп 1-3 для виготовлення ЛІКІВ проти патолопй, пов'язаних з порушенням коагуляційної функції Винахід стосується пентасахаридів, процедур їх приготування і фармацевтичних композицій, що містять їх Гепарин є полісахаридом з родини глікозаміногліканів, добре відомий як антикоагулянт Відомо (І Bjork and U Lindahl, Molecular and Cell Chemistry (ХІМІЯ молекул і клітин), 1982, Dr W Junk Publishers - Нідерланди), що коагуляція крові є складним фізіологічним явищем Певні стимули, наприклад, контактне активування і тканевий фактор включають послідовне активування ряду коагуляційних факторів, присутніх у плазмі крові Незалежно від походження стимулів, кінцеві стадії є ідентичними, активований фактор X (Ха) активує фактор II (відомий також як протромбін), що у активованій формі викликає частковий протеолізис розчинного фібриногену з вивільненням нерозчинного фібрину, який є головним компонентом кров'яного згустка являють потужні антитромботичні і антикоагуляЦІЙНІ властивості У патенті ЕР 0 454 220 описано ПОХІДНІ уронової кислоти і ПОХІДНІ глюкози, які містять як замісники О-алкільні і О-сульфатні групи Ці сполуки також мають антитромботичні і антикоагуляційні властивості Сульфатовані глікозамшогліканоідні ПОХІДНІ, у яких N-сульфатні, N-ацетатні або гідроксильні функціональні групи заміщено алкоксильною, арилоксильною, аралкоксильною або О-сульфатною групами також описано у патенті ЕР 0 529 175 Ці сполуки мають сильну антитромботичну активність і є інгібіторами проліферації клітин гладких м'язів Олігосахариди і, зокрема, пентасахариди, подібні до мінімальної ПОСЛІДОВНОСТІ гепаринів, потрібної для приєднання до AT III, описано у Angew Chem Int Ed Engl , 1993, 32, 3, 434-436 Ці сполуки містять глюкуронову кислоту або ланки глюкози, у яких гідроксильні функції заміщено Осульфатними або О-метиловою групами Багатьма дослідженнями пентасахаридів було показано, що конформація ланок G L-ідуроновоі кислоти грає важливу роль у активності цих сполук Були описані кілька конформаційних станів для ланки G ^Сі 1С4, 2Со) і було зроблене припущення, що ця конформаційна гнучкість є суттєвою для біологічної активності продуктів, що містять Lідуронову кислоту (В Casu, М Petitou, A Provasoh, Р, Smay, Conformational flexibility a new concept for explaining binding and biological properties of iduromc acid-containing glycosammoglycans (Конформаційна гнучкість нова концепція для пояснення зв'язуючих і біологічних властивостей глікозамшогліканів, що містять ідуронову кислоту) Trends Biochem, Sci 1988, 13, 221-225) За нормальних фізіологічних умов активність коагуляційних факторів регулюється протеїнами, наприклад, антитромбіном III (AT III) і кофактором II гепарину (НС II), також присутніми у плазмі AT III виявляє шпбіторну активність щодо певної КІЛЬКОСТІ коагуляційних факторів, зокрема, факторів Ха і Па Інгібування фактора Ха або фактора Па є найкращим засобом для одержання антикоагуляціиної і антитромботичної активності, оскільки ці два фактори беруть участь у двох кінцевих стадіях коагуляції незалежно від початкових стимулів Пентасахарид, описаний, наприклад, у Р Smay et al , Carbohydrate Research, 1984, 132 С5, репрезентує мінімальний ряд гепаринів, необхідний для приєднання до AT III Ця сполука була одержана приблизно 15 років тому повним ХІМІЧНИМ синтезом З того часу повним ХІМІЧНИМ синтезом було одержано і описано у літературі певну КІЛЬКІСТЬ олігосахаридів, що виявляють антитромботичну і антикоагуляційну активність У патенті ЕР 0 084 999 описано ПОХІДНІ, ЩО складаються з моносахаридних ланок уронової кислоти (глюкуронової або ідуронової) і глюкозаміну і мають антитромботичні якості Окрім компонентів, що містять гідроксильні групи, ці сполуки включають N-сульфатні групи, N-ацетильні групи і, у певних випадках, аномерні гідроксильні групи, заміщені метоксильними групами У заявці на патент ЕР 0 165 134 також описано синтетичні антитромботичні олігосахариди Ці сполуки, що складаються з моносахаридних ланок уронової кислоти і глюкозамшу і містять Осульфатну групу у 3-й позиції глюкозамшової ланки, описано також у заявці ЕР 0 301 618 Вони ви Було виявлено, що заміщення одної з Оалкільних груп алкіленовим містком і, отже, змикання конформації L-ідуроновоі кислоти породжує олігосахариди, які мають ЦІННІ біологічні властивості, але без конформаційної гнучкості Причиною цього є те, що сполуки згідно з винаходом відрізняються від інших синтетичних гепариноідів, описаних у літературі, структурою і несподівано потужними біологічними якостями Сполуки згідно з винаходом є пентасахаридами, у яких L-ідуронова ланка G лежить у так званій "блокованій" конформації 2So і у яких ланка Е D-глюкороновоі кислоти може мати етилову групу у позиції 5 Цим сполукам притаманні дуже сильна активність проти фактора Ха і велика спорідненість до AT III Винахід стосується, більш конкретно, пентасахариду у кислотній формі і його фармацевтично прийнятних солей, з одним або більше фармацевтично прийнятними катіонами, аніонна форма яких має формулу (І) 61124 яо во ООС / D "O ,8 D де R - гідроген або -SO3, (Сі-Сз)алкільна або (С2-Сз)ацильна група, Т - гідроген або етильна група, п=1 або 2 Винахід включає пентасахариди у кислотній формі або у формі фармацевтично прийнятної солі У кислотній формі функції -СОО і -SO3 мають форму-СООН і -SO3H, ВІДПОВІДНО Термін "фармацевтично прийнятна сіль пентасахаридів згідно з винаходом" означає пентасахариди, у яких одна або більше функцій -СОО і/або SO3 мають іонний зв'язок з фармацевтично прийнятним катіоном металу Бажаними солями згідно з винаходом є такі, у яких катіон обрано з катіонів лужних металів, і ще краще, ті у яких катіоном є Na+ або К+ Винахід також включає процедуру приготування пентасахаридів згідно з винаходом, згідно з якою готують пропрепарат ланки G, який з'єднують з пропрепаратом ланки Н і одержують пропрепарат GH, а пентасахарид одержують або з'єднанням пропрепарату GH з пропрепаратом DEF, або з'єднанням пропрепарату GH з пропрепаратом EF з подальшим доданням D Можна використовувати пропрепарати G, Н, EF або DEF Це означає, що такі процедури уможливлюють приготування усієї родини пентасахаридів, які містять ланку G або замкнену структуру Такі процедури передбачено винаходом, але пентасахариди винаходу можуть бути приготовлені у ІНШІ способи, ВІДОМІ у хімії сахарів, наприклад, реакцією моносахариду, що має захисні групи (описані y T W Green, Protective Groups in Organic Synthesis (Захисні групи у органічному синтезі), Wiley, N Y , 1981) на гідроксильних радикалах і, як варіант, на карбоксильних радикалах (якщо вони є), з іншим захищеним моносахаридом з утворенням дисахариду, який потім уводять у реакцію з іншим захищеним моносахаридом і одержують захищений трисахарид, з якого далі можна отримати захищений тетрасахарид і потім захищений пентасахарид Після ЦЬОГО захищені пентасахариди позбавляють захисту і, як варіант, сульфатують, або частково знімають захист, потім сульфатують, позбавляючи захисту, і одержують в результаті сполуку згідно з винаходом Такі процедури добре ВІДОМІ у ХІМІЇ вуглеводнів і описані, зокрема, у G Jaurand et al , Bioorgamc and Medicinal Chemistry Letters, 1992, 2, 9, 897-900, у J Basten et al , Bioorgamc and Medicinal Chemistry Letters, 1992, 2, 9, 905-910 і у М Petitou and С А А van Boeckel, "Chemical synthesis of heparm fragment and analogues (ХІМІЧНИЙ синтез фрагментів і аналогів гепарину)", 203-210 - Process in the chemistry of organic natural products (Процес у хімії органічних природних речовин), Ed Springer Verlag Vienna-NY 1992 Описаний вище процес дає змогу одержати сполуки згідно з винаходом у формі солей Щоб одержати ВІДПОВІДНІ кислоти сполуки винаходу у формі солей вводять у контакт з катюнообмінною смолою у кислотній формі Сполуки винаходу у кислотній формі можуть бути нейтралізовані основою для одержання бажаної солі Для цього можна використовувати органічні і неорганічні основи, які утворюють фармацевтично прийнятні солі Бажано використовувати гідроксиди натрію, калію, кальцію або магнію Бажаними є натрієві і кальцієві солі пентасахаридів Сполуки згідно з винаходом мають ЦІННІ фармакологічні і біохімічні властивості, зокрема, високу активність проти фактора Ха і велику спорідненість до AT III Як уже відзначалось, у коагулюційній ПОСЛІДОВНОСТІ фактор Ха активує протромбін з утворенням тромбіну, який протеолізує розчинний фібріноген з вивільненням нерозчинного фібрину - головного компонента кров'яного згустку Отже, інгібування фактора Ха є найкращим засобом одержання антикоагуляційної і антитромботичної дії Активність сполук згідно з винаходом проти фактора Ха оцінювали при рН 7,0 згідно з способом, описаним у Теїеп А N and Lie M , Thrombosis Research, 1977, 10, 399-410 Було показано, що активність сполук згідно з винаходом проти фактора Ха є не нижчою за цю активність, виявлену відомими синтетичними гепариноідами Спорідненість пентасахаридів згідно з винаходом, які мають аніон формули (І), до AT III була визначена спектрофлуориметрією за умов, описаних у D Atha et al , Biochemistry, 1987, 26, 6454-6461 Результати тестів підтвердили високу спорідненість сполук згідно з винаходом до AT III Крім того, загальна антитромботична активність була вивчена на щурах на моделі венозного стазу з індукцією тромбопластином згідно з методом, описаним у J Reyers et al , Thrombosis research, 1980, 18, 669-674 ЕД50 сполук згідно з винаходом була щонайменше того ж порядку або менша, ніж для відомих синтетичних гепариноідів Таким чином, сполуки згідно з винаходом мають цінну специфічність дії і виявляють сильну антикоагуляційну і протитромботичну активність Сполуки винаходу можуть бути використані при приготуванні фармацевтичних композицій для парентерального уведення Вони мають дуже низьку токсичність, рівень якої повністю відповідає їх використанню як ЛІКІВ Вони є дуже стабільними і тому придатні для приготування активних ЛІКІВ Винахід включає також фармацевтичні композиції, які містять як активний агент сполуку згідно з винаходом або одну з и фармацевтично прийнятних солей, можливо, у сполученні з одним або 61124 більше придатних інертних наповнювачів Кожна одинична доза містить аісгивний агент у КІЛЬКОСТІ, що відповідає денній дозі Кожна одинична доза містить від 0,1 до ЮОмг, бажано, від 0,5 до 50мг активного компонента Сполуки згідно з винаходом можуть бути використані у сполученні з одним або більше іншими активними агентами, корисними для бажаної терапії, наприклад, антитромботичними агентами, антикоагулянтами, агентами для запобігання агрегуванню тромбоцитів, наприклад, дипіридамолом, аспірином, тиклопідином, клопідогрелем або антагоністами глікопротешового комплекса llb/llla Призначенням фармацевтичних композицій є уведення ссавцям, включаючи людину, для лікування вищезгаданих захворювань Такі фармацевтичні композиції можуть мати різні форми, наприклад, бути питними розчинами або розчинами для ІН'ЄКЦІЙ, таблетками з цукровим покриттям, простими таблетками або желатиновими капсулами Бажаними є розчини для ІН'ЄКЦІЙ Фармацевтичні композиції згідно з винаходом можна використовувати, зокрема, для профілактики або лікування розладів стінок судин, наприклад, атеросклерозу, станів, пов'язаних з підвищеною коагуляцією, наприклад, після хірургічної операції на пухлині або руйнування тромбу, викликаного бактеріальною, вірусною або ферментативною дією Взагалі, пентасахариди згідно з винаходом можна використовувати для лікування патолопй, пов'язаних з коагуляційною дисфункцією Дозування можна варіювати у широких межах залежно від віку, маси, стану здоров'я, походження і гостроти захворювання і способу уведення Дозування включає уведення одної або більше денних доз від приблизно 0,5мг до приблизно ЮООмг, бажано, від приблизно 1мгдо приблизно ЮОмг, найкраще від приблизно 0,5мг до приблизно 50мг, наприклад, приблизно 20мг внутрішньом'язово або підшкірне серією або через регулярні інтервали, або орально денною дозою від приблизно 200мг до приблизно ЮООмг Звичайно, ці дози для кожного пацієнта можуть бути скориговані залежно від результатів лікування і аналізів крові, зроблених заздалегідь Бажаним способом уведення є підшкірне Отже, винахід включає також фармацевтичні композиції, які як активний агент містять одне або більше згаданих вище сполук, як варіант, у сполученні з іншим активним агентом Ці композиції пристосовують для парентерального уведення або уведення через систему травлення Фармацевтичні композиції винаходу можна уводити тваринам і людині орально, під'язично, трансдермально, підшкірне, внутрішньом'язово, внутрішньовенно, через слизову, локально або ректально у одиничних формах у суміші з стандартними фармацевтичними допоміжними компонентами Одиничні форми для уведення включають такі оральні форми, як оральні суспензії, розчини, гранули і порошки, желатинові капсули і таблетки, ПІД'ЯЗИЧНІ І ЩІЧНІ форми для уведення, підшкірні, внутрішньом'язові, внутрішньовенні, назальні або окові форми і ректальні форми для уведення При приготуванні твердої композиції у формі 8 таблеток головний активний інгредієнт змішують з таким фармацевтичним носієм, як желатин, крохмаль, лактоза, стеарат магнію, тальк, гуміарабік тощо Таблетки можна покривати сахарозою або іншою придатною речовиною або надавати їм затриману або уповільнену активність, щоб вони безперервно вивільняли зумовлену КІЛЬКІСТЬ активного агента Желатинові капсули виготовляють змішуючи активний агент з розріджувачем і заливаючи одержану суміш у м'які або жорсткі желатинові капсули Водні дисперсії порошків або гранул можуть містити активний інгредієнт, змішаний з диспергуючими або зволожуючими агентами або з суспендуючими агентами, наприклад, полівшілпіролідоном, а також з підсолоджувачами або покращувачами смаку Для ректального уведення використовують супозиторії, які приготовляють з зв'язуючими, що плавляться при ректальній температурі, наприклад з маслом какао або поліетиленгліколем Для парентерального, назального або окового уведення використовують водні суспензії, ІЗОТОНІЧНІ фізіологічні розчини або стерильні розчини для ІН'ЄКЦІЙ, ЯКІ МІСТЯТЬ фармакологічно придатні дис пергуючі і/або зволожуючі агенти, наприклад, пропіленгліколь або бутиленгліколь Для уведення через слизову активний інгредієнт використовують у суміші з активатором, яким може бути, наприклад, сіль жовчної кислоти, такий гідрофільний полімер, як, наприклад, пдроксипропіл целюлоза, гід роксипропіл метил целюлоза, пдроксіетил целюлоза, етилцелюлоза, карбоксиметилцелюлоза, декстран, полівшілпіролідон, пектини, крохмалі, желатин, казеїн, акрилові кислоти, акрилові естери і їх співполімери, ВІНІЛОВІ полімери або співполімери, поліетиленоксидні полімери, ВІНІЛОВІ спирти, алкоксильні полімери, поліестери або їх суміші Активний агент може також мати форму мікрокапсул, як варіант, з одним або більше носіями або добавками Активний агент може мати форму комплексів з циклодекстрином, наприклад а-, р- або Я,-циклодекстрином, 2-пдроксипропіл-р-циклодекстрином або метил-р-циклодекстрином Активний агент можна вивільняти з балону, що містить його, або внутрішньосудинним розширювачем, уведеним у кров'яну судину Це не впливає на фармакологічну активність активного агента Наведені далі способи приготування ілюструють синтез різних штермедіатів, що можуть бути використані для одержання пентасахаридів винаходу Абревіатури ТБДС - трет-бутилдиметилсиліл, ТШХ - тонкошарова хроматографія, РВІМС - рідинна вторинноіонна мас-спектрометрія, МС - мас-спектрометрія, МСІЕР - мас-спектрометрія з іонізацією електророзпилюванням, ТМС - триметилсиліл, ТСН - триметилсилілтетрадейтеропропюнат натрію, МС молекулярні сита, Тф - трифталат, РМБ - рметоксибензил, СЕ -триметилсилілетил Dowex®, Sephadex®, Chelex®, Toyopearl® зареєстровані товарні знаки 10 9 61124 У описаних далі приготуваннях і прикладах, оліго- і полісахаридів гідруванням бензилових есзагальні процедури каталітичного з'єднання імідатерів або етерів, сапоніфікації естерів або сульфатів, розщеплення левулінових естерів, каталітичтування можна здійснювати, застосовуючи загального з'єднання ТІОГЛІКОЗИДІВ, сапоніфікації, метилні методи до штермедіатів ювання і селективного зняття захисту р-метоксиСполуки винаходу синтезують згідно з пригобензильної групи, зняття захисту і сульфатування туваннями, наведеними нижче СХЕМА 1 - Приготування препарату GH (171 2 Приготування монасакариду-донора твєо но—І Окислення ( S W E R N ) 6-К IR-120.HP 8О"С. в ГОД. , ПІрИДИН « 7Б% у двох стадіях СХЕМА 1 - п р о д о в ж е н н я 1 2. При г о т у в а н н я і перше перетворення д и с а х а р и д у .ОАі ОВп м.оні. міом 2O*C , Э ГОД. 4. А Молекулярні сита сн.еи" Ma,C{OU>),, APT ацетон О ОКИСЛеННЯ ( S W E R N I 70% o v e r tvwo s t e p s NoOH, H,Oj 70% у д в о х стадіях СХЕМА 1 - продовження 2 3. Конструювання біциклічної' схеми О Е І О Н . 7D-C ЗГОД. 7ОЧ* 1) Оэ, C H a C l j . -7в*С 2) N B C I O J . МеТИПбутеН, t B u O H 3) В п в г , Ю ^ С О Э . D M P 75 % Приготування 1 6-О-трет-бутилдиметилсиліл-1,2-Оізопропіліден-З-О-метил-а-О-глюкофураноза (2) Дюл 1 (10г, 42,7ммоль) вносять у безводний ДХМ (ЮОмл) і додають трет-бутилдиметилсиліл хлорид (7,1г, 47,3ммоль) і імідазол (5,8г, 85,3ммоль) Реакційну суміш перемішують при кімнатній температурі протягом 2год , після чого розводять ДХМ і промивають водою Органічну фазу висушують над сульфатом магнію і концентрують Залишок очищують хроматографією на колонці силікагелю (етилацетат/циклогексан, 1 9 12 11 61124 об'єми) і одержують бажану речовину 2 (11,9г, [