Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Способ определения содержания фибриногена в плазме крови при гепаринотерапии путем до­бавления к ней фосфатного буфера, инкубирования с коагулирующим ферментом, из­влечения сгустка фибрина, промывки, растворе­ния н последующего анализа полученного раствора, отличающийся тем, что в качестве коа­гулирующего фермента используют фермент, по­лученный из яда змей Agkistrodon halys halys, в концентрации нсеменее 0,2 NIH ед./мл смеси.

Текст

УКРАЇНА (19) V^/* 10374 (5D6 G01 N33/49; А 61 К 35/16 ДЕРЖАВНЕ ПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО ОПИС ДО ПАТЕНТУ НА ВИНАХІД (54) СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ ВМІСТУ ФІБРИНОГЕНУ В ПЛАЗМІ КРОВІ ПРИ ГЕПАРИНОТЕРАПІ? (21) 93020162 (22) 11.12.92 (24) 29.12.99 (46) 29.12.99. Бюл. № в (*6) Авторское свидетельство СССР Ns 97886?, кл. А 61 К 35/16, опублик. 1982. (72) Соловйов Дмитро Олександрович, Платонова Тетяна Миколаївна, Сушко Олена Олександрівна, Єна Ярослав Михайлович, Угарова Тетяна Петрівна 473) Інститут біохімії їм. О.В. Палладіна НАН України (57) Способ определения содержания фибриногена в плазме крови при геларинотерапии путем добавления к ней фосфатного буфера, инкубирования с коагулирующим ферментом, извлечения сгустка фибрина, промывки, растворения и последующего анализа полученного раствора, о тл и ч а ю щ и й с я тем, что в качестве коагулирующего фермента используют фермент, полученный из яда змей Agkistrodon halys halys, в концентрации не менее 0,2 NIH ед./мл смеси. Изобретение относится к медицине и может быть использовано при диагностике заболеваний, связанных с патологией системы гемостаза, одним из важнейших показателей которой является содержание фибриногена в плазме крови. Определение содержания названного параметра -важный клинико-лабораторный •тест. Известно, что повышенный уровень фибриногена является фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний (ишемия сердца, инсульт, артериальная гипертензия, тромбообразование) и метастазирования при злокачественных новообразованиях. Известные в клинико-лабораторной практике способы определения содержания фибриногена в плазме крови, основаны на свертывании фибриногена тромбином. При этом содержание фибриногена определяют путем добавления фосфатного буфера в плазму, инкубирования сме си с тромбином, извлечения сгустка фибрина, растворения в щелочи и определения количества белка. Этот способ недостаточно оперативен и точен. Более точные результаты достигаются, когда уровень фибриногена определяют по способу, в котором дополнительно в плазму после фосфатного буфера водят раствор монойодуксусной кислоты, а затем раствор тромбина, содержащий ионы кальция, а после промывки сгусток фибрина растворяют в 1,5% уксусной кислоте, взятой в соотношении /20-25/: 1 к исследуемой плазме. Однако эти способы не воспроизводятся при наличии в плазме эндо- и экзогенных ингибиторов свертывания, например при гепаринотерапии. Для объективного определения содержания фибриногена при гепаринотерапии в пробу за 5 мин до внесения тромбина прибавляют о О 10374 протаминсульфат для нейтрализации ингибирующего действия гепарина. Осуществление этого теста усложнено, так как необходим специальный подбор доз протаминсульфата, объясняемый отсутствием идентичности в характеристиках гепариносвязывающей активности препаратов протаминсульфата, выпускаемых различными фирмами. Это обстоятельство усложняет возможность стандартизации теста. В зарубежной клинической диагностике известно применение ферментных препаратов из яда змей Atraxin (Sigma). ReptiJase~R (Boehringer), нечувствительных к гепарину в плазме. Однако указанные препараты используют исключительно в тестах по определению атроксинового или рептилазного времени свертывания плазмы. Неизвестен способ определения содержания фибриногена в плазме крови с использованием препаратов из яда змей. Поставленная задача состоит в разработке простого и точного способа определения содержания фибриногена в плазме крови при наличии в крови эндо- и экзогенных ингибиторов свертывания крови, в частности при гепаринотерапии. Предложен способ определения содержания фибриногена в плазме крови при гепаринотерапии, где кроме известных операций: добавление фосфатного буфера, инкубироваі !ие с коагулирующим ферментом, извлечение сгустка фибрина, промывка, растворение и определение количества белка, -инкубирование проводят с коагулирующим ферментом "Анцистрон-Н" в концентрации не менее 0,2 NIH Ед/мл смеси. Этот фермент производят из яда змей вида Щитомордник обыкновенный (Agkistrodon halys halys) в Институте биохимии им. А.В. Палладина (АН Украины, г. Киев). Молекулярная масса фермента 34 кДа. Подобно большинству остальных тромбиноподобных ферментов из яда змей он отщепляет от молекулы фибриногена только фибринопептиды А, обладает слабой фибринолитической активностью (со временем плотностью расщепляет А ацепь фибриногена), не активирует факторы свертывания II. X. XIII. Протеин С, плазминоген. Его коагулирующая активность не ингибируется гирудином с антитромбином 11 в присутствии гепарина. 1 Использование указанного фермента соответствующей концентрации в общей совокупности операций обеспечивает достижение неожиданного эффекта: в отличие от способа-прототипа, который не осуществим при гепаринотерапии, новый спо 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 соб позволяет точно и оперативно определять уровень фибриногена в плазме крови в присутствии эндо и экзогенных ингибиторов свертывания. Схема проведения нового способа упрощена, т. к. исключены специальные операции по внесению раствора монойодуксусной кислоты, по приготовлению тромбина, содержащего ионы, кальция или подбора необходимых количеств протаминсульфата. Воспроизводимость изобретения иллюстрируется примерами конкретного осу* ществления способа, результатами сравнительных испытаний нового способа и способа-прототипа при исследовании контингента больных в условиях гепаринотерапии (табл. 1) и контингента больных с артериальной гипертензией пожилого и старческого возраста (табл. 2), а также результатами исследования донорской плазмы с внесением определенных количеств экзогенного фибриногена (табл. 3). Исследования проводят на стандартной плазме, полученной при смешивании плазм крови здоровых доноров, путем введения в нее препаратов гепарина и фраксипарина -препарата низкомолекулярного гепарина (Fraxiparin, фирма Sanofi, Франция). П р и м е р ы 1-5. (оптимальные условия -табл. 1). В стеклянную пробирку (12x1 см) вносят 0,2 мл исследуемой плазмы и 1,7 мл 0,06 М фосфатного буфера, рН 7,0. Раствор перемешивают и помещают в водяной термостат, нагретый до 37°С. Через 2 мин в раствор добавляют 0,1 мл препарата 5,0 NIH ед./мл Анцистрона-Н. Смесь вновь тщательно перемешивают стеклянной палочкой с шероховатой поверхностью и опять помещают в термостат, оставляя палочку в пробирке, (расчет Анцистирона-Н на 1 мл смеси составляет 0,25 NIH ед./ мл. После 30 мин инкубации образовавшийся сгусток фибрина извлекают*путем наматывания на папочку и жидкость отжимают о стенки пробирки. Далее, отжатый сгусток, не снимая с палочки несколько раз промывают в холодном растворе 0,15 М NaCI, удаляя промывную жидкость с поверхности сгустка фильтрованной бумагой. Высушенный сгусток растворяют в 5 мл 1,5% уксусной кислоты. Концентрацию белка в полученном растворе определяют спектрофотометрически, измеряя поглощение при длине волны 280 нм и 320 нм (поглощение при 320 нм определяют для расчета поправки на мутность раствора). Содержание фибриногена в исследуемом образце рассчитывают по формуле: 10374 Ф = [

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Method for determination of fibrinogen content in blood plasma during heparinotherapy

Автори англійською

Solov'iov Dmytro Oleksandrovych, Platonova Tetiana Mykolaivna, Sushko Olena Oleksandrivna, Yena Yaroslav Mykhailovych, Uharova Tetiana Petrivna

Назва патенту російською

Способ определения содержания фибриногена в плазме крови при гепаринотерапии

Автори російською

Соловьев Дмитрий Александрович, Платонова Тетьяна Николаевна, Платонова Татьяна Николаевна, Сушко Елена Александровна, Ена Ярослав Михайлович, Угарова Татьяна Петровна

МПК / Мітки

МПК: A61K 35/16, G01N 33/49

Мітки: крові, спосіб, вмісту, визначення, плазми, фібриногену, гепаринотерапії

Код посилання

<a href="http://uapatents.com/8-10374-sposib-viznachennya-vmistu-fibrinogenu-v-plazmi-krovi-pri-geparinoterapi.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб визначення вмісту фібриногену в плазмі крові при гепаринотерапії</a>

Подібні патенти