Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб виявлення та оцінки оксидативного стресу в сперматозоїдах еякуляту, що включає мікроскопічну оцінку забарвлення в реакції зв'язування та відновлення нітросинього тетразолію до депозитів диформазану темно-синього кольору під впливом активних форм кисню при оксидативному стресі, який відрізняється тим, що визначають в забарвлених препаратах еякуляту процентний вміст диформазанпозитивних сперматозоїдів, при цьому збільшення відсотка диформазанпозитивних сперматозоїдів, що містять малі, великі та дрібні темно-сині депозити відновленого дифармазану і займають більше 50 % цитоплазми сперматозоїда, свідчить про кількість сперматозоїдів, що перебувають в стані оксидативного стресу.

Текст

Реферат: Спосіб виявлення та оцінки оксидативного стресу в сперматозоїдах еякуляту включає мікроскопічну оцінку забарвлення в реакції зв'язування та відновлення нітросинього тетразолію до депозитів диформазану темно-синього кольору під впливом активних форм кисню при оксидативному стресі. Визначають в забарвлених препаратах еякуляту процентний вміст диформазанпозитивних сперматозоїдів. Збільшення відсотка диформазанпозитивних сперматозоїдів, що містять малі, великі та дрібні темно-сині депозити відновленого дифармазану і займають більше 50 % цитоплазми сперматозоїда, свідчить про кількість сперматозоїдів, що перебувають в стані оксидативного стресу. UA 74765 U (12) UA 74765 U UA 74765 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме до урології та клінічної імунології і може бути використана для виявлення та оцінки оксидативного стресу в сперматозоїдах еякуляту. Відомо, що оксидативний стрес є однією з важливих характеристик еякуляту. Під впливом оксидативного стресу в сперматозоїдах активується перекисне окислення ліпідів плазматичної мембрани, ушкоджується структура мітохондріальної та геномної ДНК. Оксидативний стрес розвивається внаслідок "респіраторного вибуху" - різкого посилення кисневого метаболізму в активованих клітинах, результатом якого є утворення первинних (О 2 супероксидний аніон, 1 1 перекис водню Н2О2, гідроксильний радикал ОН, синглетний кисень q і q+) та вторинних метаболітів (гіпохлорна кислота НОСІ, гіпохлорид СІО хлорамін, продукти перикисного окислення ліпідів) активних форм кисню за участю ферментів гексозомонофосфатного шунта, а саме НАДФН-оксидазної системи (NADPH-oxidase). Найбільш повно функціонування ферментів НАДФН-оксидазної системи описано для лейкоцитів, проте визначено, що подібні до лейкоцитарних, але з меншою активністю, вони присутні в багатьох типах клітин, у тому числі і в сперматозоїдах. При цьому ушкодження сперматозоїдів активними формами кисню під час оксидативного стресу відіграє істотну роль в патогенезі чоловічої неплідності. Відомо, що для оцінки оксидативного стресу в еякуляті є luminol-залежний хемілюмінесцентний метод. [1], який включає визначення співвідношення активної форми кисню до антиоксидантної активності, тобто представлена повна характеристика неферментативної антиоксидантної активності та продукції активних форм кисню в еякуляті на luminometerприладі. Недоліком способу є те, що показник, оксидативного стресу в еякуляті отримують хемілюмінесцентним методом на luminometer-приладі, що обмежує широке використання методу в клінічній практиці, та не розраховують цей показник для лейкоцитів і сперматозоїдів в еякуляті. Відомий також спосіб оцінки оксидативного стресу в лейкоцитах крові у хворих на хронічні захворювання легень за допомогою нітросинього тетразолію [2], який взятий за прототип, заснований на реакції зв'язування та відновлення нітросинього тетразолію до депозитів диформазану темно-синього кольору під впливом активних форм кисню при оксидативному стресі при мікроскопічному дослідженні лейкоцитів крові. Недоліком способу є те, що спосіб використовують тільки для мікроскопічної оцінки оксидативного стресу в лейкоцитах крові. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалити спосіб виявлення та оцінки оксидативного стресу в сперматозоїдах еякуляту шляхом мікроскопічного визначення в забарвлених препаратах еякуляту процентного вмісту сперматозоїдів, що містять малі, великі та дрібні темно-сині депозити відновленого дифармазану і займають більше 50 % цитоплазми сперматозоїда, а збільшення їх відсотка, свідчить про кількість сперматозоїдів, що перебувають в стані оксидативного стресу і може бути додатковим інформативним показником зниження фертильних властивостей еякуляту при екскреторно-токсичному неплідді. Поставлена задача вирішується тим, що спосіб виявлення та оцінки активності оксидативного стресу в сперматозоїдах еякуляту, що включає мікроскопічну оцінку забарвлення в реакції зв'язування та відновлення нітросинього тетразолію до депозитів диформазану темносинього кольору під впливом активних форм кисню при оксидативному стресі, згідно з корисною моделлю, визначають в забарвлених препаратах еякуляту процентний вміст диформазанпозитивних сперматозоїдів, при цьому збільшення відсотка диформазанпозитивних сперматозоїдів, що містять малі, великі та дрібні темно-сині депозити відновленого дифармазану і займають більше 50 % цитоплазми сперматозоїда, свідчить про кількість сперматозоїдів, що перебувають в стані оксидативного стресу. Спосіб виявлення та оцінки оксидативного стресу в сперматозоїдах виконують наступним чином: в скляну центрифугальну пробірку напівавтоматичною піпеткою з наконечником разового використання додають 100 мікролітрів еякуляту та 100 мікролітрів 0,1 % розчину нітросинього тетразолію у фосфатному буфері (рН 7,2-7,4), проби ретельно розмішують та витримують 30 хвилин в термостаті при t 37 °C. На знежиреному предметному склі змішують краплю проби з пробірки, додають краплю еозину (3 % розчин на дистильованій воді), добре розмішують та через 1 хвилину за допомогою пластикового шпателя або накривного скла легким рухом роблять мазок. Мазки повинні бути тонкими, рівномірними, займати не більше 2/3 предметного скла і закінчуватися "щіточкою". Мазок висушують на повітрі. Підрахування відсотка сперматозоїдів, які містять гранули диформазану темно-синього кольору, проводять під імерсійним об'єктивом (900 або 1000). Забарвлення мазка - оранжево-червоний колір. Диформозанпозитивними вважають такі сперматозоїди, що містять малі, великі та дрібні темносині депозити відновленого дифармазану і займають більше 50 % цитоплазми сперматозоїда. 1 UA 74765 U 5 10 15 Практичне використання способу, що пропонується, проведено в лабораторії імунології та відділі сексопатології та андрології ДУ "Інститут урології НАМИ України". Визначення показників оксидативного стресу в сперматозоїдах проведено у 83 чоловіків репродуктивного віку (25-45 років), хворих на хронічний простатит, ускладнений екскреторно-токсичним непліддям. Визначення продукції активних форм кисню сперматозоїдами за показниками мікроскопічної оцінки реакції зв'язування та відновлення нітросинього тетразолію до депозитів диформазану темно-синього кольору наведені в таблиці. Як свідчать наведені в таблиці дані, за показниками мікроскопічної оцінки реакції зв'язування та відновлення нітросинього тетразолію до депозитів диформазану темно-синього кольору, для сперматозоїдів еякуляту здорових чоловіків, характерна низька генерація активних форм кисню, відсоток сперматозоїдів, в цитоплазмі яких малі, великі та дрібні темно-сині депозити відновленого дифармазану складають 15,5±4,2 %. У хворих на хронічний простатит відсоток сперматозоїдів, 50 % цитоплазми яких містять гранули диформазану, складають 75,0 % +16,3 %, що більше за показники практично здорових чоловіків і може бути фактором формування патоспермії при екскреторно-токсичному неплідді. Таблиця Показники оксидативного стресу за вмістом депозитів диформазану в сперматозоїдах еякуляту хворих на хронічний простатит та здорових донорів Групи обстежених % сперматозоїдів, які містять депозити диформазану Статист, показник Ρ 75,0±16,3

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Method for detection and estimation of oxidative stress in ejaculate spermatozoids

Автори англійською

Drannik Heorhii Mykolaiovych, Horpynchenko Ihor Ivanovych, Dobrovolska Liudmyla Ivanivna, Poroshyna Tetyana Viktorivna, Nurimanov Kamil Raisovych

Назва патенту російською

Способ выявления и оценки оксидативного стресса в сперматозоидах эякулята

Автори російською

Дранник Георгий Николаевич, Горпинченко Игорь Иванович, Добровольская Людмила Ивановна, Порошина Татьяна Викторовна, Нуриманов Камиль Раисович

МПК / Мітки

МПК: G01N 33/543, A61P 13/08, G01N 33/487

Мітки: оксидативного, сперматозоїдах, спосіб, виявлення, еякуляту, оцінки, стресу

Код посилання

<a href="http://uapatents.com/5-74765-sposib-viyavlennya-ta-ocinki-oksidativnogo-stresu-v-spermatozodakh-eyakulyatu.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб виявлення та оцінки оксидативного стресу в сперматозоїдах еякуляту</a>

Подібні патенти