Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу igm до вірусу краснухи, уніфікована “dia- rubella-igm-u”

Реферат: Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgM до вірусу краснухи, уніфікована "DIA-Rubella-IgM-u", в якій антигени вірусу краснухи використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовані антилюдські-антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою. В тест-системі застосовується імуносорбент з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини, а кон'югат - антигени збудника вірусу краснухи, мічені пероксидазою, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. UA 72426 U (12) UA 72426 U UA 72426 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для виявлення антитіл класу IgM до вірусу краснухи в сироватці або плазмі крові людини з метою визначення активного перебігу інфекції - вперше набутої або її рецидиву. Вірус краснухи (Rubella virus) належить до родини Togaviridae і є РНК-вмісним вірусом розміром 50-70 нм в діаметрі. Вірус викликає широко розповсюджене захворювання зі слабковираженими симптомами, що характеризується лихоманкою, лімфаденопатією, плямисто-вузликовою висипкою. Однак частина випадків перебігає в безсимптомній формі, що ускладнює клінічну діагностику краснухи. В дитячому віці це захворювання не дає суттєвих ускладнень, але якщо первинне інфікування відбувається під час вагітності, існує значний ризик отримання суттєвих пошкоджень плоду. В лабораторній діагностиці краснухи найбільш широко використовуються серологічні методи. Імунологічним маркером первинної інфекції є IgM антитіла до вірусу краснухи, що з'являються в перші дні захворювання. Максимальний рівень IgM-антитіл спостерігається на 2-3 тижні та знижується через 1-2 місяці. IgM специфічні до вірусу краснухи антитіла виявляються також при вакцинації пацієнта. Відома тест-система для виявлення імуноглобулінів класу М проти вірусу краснухи у сироватках і плазмі крові людини при діагностиці краснухи [1]. В основі тест-системи лежать антигени збудника вірусу краснухи, використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовані антилюдські-антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою. Суть корисної моделі в створенні імуноферментної тест-системи для визначення наявності антитіл класу IgM до вірусу краснухи в сироватці або плазмі крові людини з використанням моноклональних антитіл проти IgM людини на твердій фазі, кон'югату - антигену вірусу краснухи, міченого пероксидазою та однокомпонентного розчину хромогену. Поставлена задача вирішується шляхом використання імуносорбенту з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини. При внесенні в лунки планшету досліджувані зразки сироваток, при наявності в них імуноглобулінів класу М, утворюються комплекси анти-IgM-IgM. На наступному етапі IgM, специфічні саме до вірусу краснухи, виявляють за допомогою антигенів вірусу краснухи у складі пероксидазного кон'югату і однокомпонентного розчину хромогену. Приклад. Визначення наявності антитіл до вірусу краснухи в сироватці крові хворої Г., 1998 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Для цього в лунки імуносорбенту з фіксованими на ньому моноклональними антитілами проти IgM людини вносять по 100 мкл попередньо розведених сироваток (1:50) і позитивний та негативний контролі. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (37±2) °С протягом 60 хв. Після закінчення інкубації промивають планшет 4 рази розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл кон'югату. Знову інкубують планшет при (37±2) °С протягом 30 хвилин. Промивають планшет 6 разів розчином для промивання і вносять в лунки по 100 мкл однокомпонентного розчину хромогену ТМБ. Накривають планшет кришкою та інкубують при температурі (18-25) °С в темному місці протягом 30 хвилин. Для зупинення кольорової реакції вносять в лунки по 100 мкл стоп-реагенту (в тій же послідовності внесення що й ТМБ). Не більше як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі (450 нм відносно 620 нм). Для обліку результатів розраховують середнє значення ОГ негативного контролю – НКсер і граничне значення (ГЗ) по формулі: ГЗ= НКсер+0,3. Результат аналізу вважається негативним, якщо ОГ досліджуваного зразка менше ГЗ. Результат аналізу вважається позитивним, якщо ОГ досліджуваного зразка більше ГЗ. Досліджений матеріал від хворої було ідентифіковано як позитивний на наявність антитіл класу IgG до вірусу краснухи. Використана література: 1. Інструкція по застосуванню тест-системи „Rubella Vims IgM-ELISA", Novatec, Німеччина. 2. Михайлов А.Т., Симирский В.Н. Методы иммунохимического анализа в биологии развития. - М, Наука. - 1981. 55 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 60 Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл класу IgM до вірусу краснухи, уніфікована, в якій антигени вірусу краснухи використані в складі імуносорбенту, а як кон'югат застосовані антилюдські-антитіла проти IgM, зв'язані з пероксидазою, яка відрізняється тим, 1 UA 72426 U що в тест-системі застосовується імуносорбент з сорбованими на твердій фазі моноклональними антитілами проти IgM людини, а як кон'югат - антигени збудника вірусу краснухи, мічені пероксидазою, який виявляють за допомогою однокомпонентного розчину хромогену. 5 Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2