Є ще 24 сторінки.

Дивитися все сторінки або завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

1. Рідка композиція, що містить лютеїнізуючий гормон (LH) або його варіант, яка відрізняється тим, що вказана композиція включає фосфатний буфер і стабілізуючу кількість аргініну або його солей в концентрації від 10 до 50 мг/мл і/або лізину або його солей в концентрації від 10 до 50 мг/мл.

2. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що вказаний лютеїнізуючий гормон (LH) являє собою лютеїнізуючий гормон людини (ЛГл).

3. Композиція за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що вказаний лютеїнізуючий гормон (LH) являє собою рекомбінантний лютеїнізуючий гормон людини (р-ЛГл).

4. Композиція за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що вказаний лютеїнізуючий гормон (LH) являє собою лютеїнізуючий гормон з сечі людини (с-ЛГл).

5. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка відрізняється тим, що вказаний лютеїнізуючий гормон (LH) присутній в концентрації, що складає від точно або приблизно 1 до точно або приблизно 50 мг/мл.

6. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, де вказаний фосфатний буфер присутній в концентрації, що складає від 1 до 100 мМ.

7. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, де вказаний фосфатний буфер являє собою переважно натрій-фосфатний буфер.

8. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, що включає також поверхнево-активну речовину.

9. Композиція за п. 8, яка відрізняється тим, що вказана поверхнево-активна речовина являє собою полісорбат 20.

10. Композиція за п. 9, яка відрізняється тим, що вказаний полісорбат 20 присутній в концентрації, що складає від 0,01 до 10 мг/мл.

11. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка додатково містить також метіонін.

12. Композиція за п. 11, де метіонін присутній в концентрації, що складає від 0,01 до 5,0 мг/мл.

13. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка додатково містить бактеріостатичну речовину.

14. Композиція за п. 13, яка відрізняється тим, що вказана бактеріостатична речовина вибрана з групи, що складається з бензилового спирту, фенолу і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію.

15. Композиція за п. 13 або 14, яка відрізняється тим, що вказана бактеріостатична речовина присутня в концентрації, що складає від 0,005 до 15 мг/мл.

16. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка додатково містить воду для ін'єкцій.

17. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, що має рН в діапазоні значень від 7,5 до 8,5.

18. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, що включає щонайменше 25 мкг/мл р-ЛГл, 1,65 мг/мл Na2HPO4·2H2O, 0,104 мг/мл NaH2PO4·H2O, 31,5 мг/мл моногідрохлориду L-аргініну, 0,05 мг/мл полісорбату 20, 0,5 мг/мл метіоніну і 5 мг/мл фенолу.

19. Композиція за будь-яким з пп. 1-17, що включає щонайменше 25 мкг/мл р-ЛГл, 1,65 мг/мл Na2HPO4·2H2O, 0,104 мг/мл NaH2PO4·H2O, 28,5 мг/мл моногідрохлориду лізину, 0,05 мг/мл полісорбату 20, 0,5 мг/мл метіоніну і 12 мг/мл бензилового спирту.

20. Композиція за будь-яким з пп. 1-17, що включає щонайменше 25 мкг/мл р-ЛГл, 1,65 мг/мл Na2HPO4·2H2O, 0,104 мг/мл NaH2PO4·H2O, 28,5 мг/мл моногідрохлориду лізину, 0,05 мг/мл полісорбату 20, 0,05 мг/мл метіоніну, 3 мг/мл бензилового спирту і 0,01 мг/мл хлориду бензалконію.

21. Фармацевтичний лікарський засіб, який включає композицію за будь-яким з пп. 1-20.

22. Контейнер, який містить фармацевтичний лікарський засіб за п. 21.

23. Спосіб одержання композиції за будь-яким з пп. 1-20, що включає розбавлення лютеїнізуючого гормону (LH) розчином ексципієнтів.

24. Застосування композиції за будь-яким з пп. 1-20 для одержання лікарського засобу.

25. Застосування композиції за будь-яким з пп. 1-20 при одержанні лікарського засобу для лікування інфертильності у жінок і/або чоловіків.

26. Застосування композиції за будь-яким з пп. 1-20 в поєднанні з рідкою композицією, що включає фолікулостимулюючий гормон (ФСГ) або його варіант.

27. Композиція за будь-яким з пп. 1-20 для лікування інфертильності у жінок і/або чоловіків.

Текст

Реферат: Винахід належить до галузі фармацевтики і стосується рідких фармацевтичних композицій лютеїнізуючого гормону (LH) для однодозового або багатодозового введення. Винахід також стосується застосування та способу одержання вказаних композицій. UA 101484 C2 (12) UA 101484 C2 UA 101484 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Галузь техніки, до якої належить винахід Даний винахід стосується рідких фармацевтичних композицій лютеїнізуючого гормону (LH), а також способів одержання таких композицій. Передумови створення винаходу Лютеїнізуючий гормон (LH), фолікулостимулюючий гормон (ФСГ) і хоріонічний гонадотропін (ХГ) являють собою білки, що вводяться ін’єкцією, що належать до класу гонадотропінів. LH, ФСГ і ХГ використовуються кожен окремо і в поєднанні при лікуванні безпліддя і розладів репродуктивної функції як у жінок, так і у чоловіків. У природних умовах, ФСГ і LH продукуються гіпофізом. Для цілей використання в фармацевтичних препаратах, ФСГ і LH, а також їх варіанти можуть бути створені по рекомбінантній технології (рФСГ і рЛГ) або можуть бути одержані з сечі жінок в пост-менопаузі (мФСГ і мЛГ). ФСГ використовують для індукції овуляції (ОI) у жінок і при контрольованій гіперстимуляції яєчників (КГЯ) в рамках допоміжних репродуктивних технологій (ДРТ). При проведенні стандартного курсу лікування, направленого на індукцію овуляції, пацієнтці проводять щоденні ін'єкції ФСГ або варіанту ФСГ (приблизно від 75 до 300 МО ФСГ/день) протягом періоду часу від приблизно 6 до приблизно 12 днів. При проведенні стандартного курсу лікування, направленого на контрольовану гіперстимуляцію яєчників пацієнтці проводять щоденні ін'єкції ФСГ або варіанту ФСГ (приблизно 150-600 МО ФСГ/день) протягом періоду часу від приблизно 6 до приблизно 12 днів. ФСГ також застосовують для індукції сперматогенезу у чоловіків з олігоспермією. Курс лікування, що включає введення 150 МО ФСГ 3 рази на тиждень в поєднанні з 2500 МО хоріонічного гонадотропіну людини (ХГл) два рази на тиждень, дозволяв підвищити кількість сперми, що виробляється у чоловіків з гіпогонадотропним гіпогонадизмом (Burgues etal., 1997). LH застосовують при лікуванні жінок-пацієнток в поєднанні з ФСГ при OІ і при КГЯ, зокрема тих пацієнток, які мають дуже низькі ендогенні рівні LH або які резистентні до LH, наприклад, при лікуванні тих жінок, у яких є гіпогонадотропний гіпогонадизм (ГГ, група I по класифікації ВООЗ) або при лікуванні пацієнток більш зрілого віку (тобто у віці 35 років або старше), а також при лікуванні тих пацієнток, у яких є проблема імплантації або відмічалися ранні викидні. LH в поєднанні з ФСГ традиційно був доступний у вигляді препарату, відомого як препарат на основі людських менопаузальних гонадотропінів (МГл), який одержували екстракцією з сечі жінок в періоді менопаузи. Препарат МГл характеризується співвідношенням активності ФСГ: LH, що дорівнює 1:1. ХГ діє на той же рецептор, що і LH, і викликає такі ж реакції. ХГ характеризується більш тривалим періодом напіввиведення з кровотоку, ніж LH, і, в зв'язку з цим, звичайно застосовується як пролонговане джерело LH-активності. ХГ використовують в курсах лікування OI і КГЯ з метою імітації природних пікових рівнів LH і для запуску овуляції. Ін'єкцію людського хоріонічного гонадотропіну (хоріонічного гонадотропіну людини) використовують для ініціації овуляції по закінченні стимуляції під дією ФСГ або суміші ФСГ і LH. ХГ може також використовуватися в поєднанні з ФСГ для стимуляції в курсі лікування OI і КГЯ, з тим щоб забезпечити активність LH в ході стимуляції у тих пацієнток, для яких бажана LH-активність, наприклад, у таких пацієнток, які були відмічені вище. ФСГ, LH і ХГ є членами сімейства гетеродимерних глікопротеїнових гормонів, яке також включає тиреотропний гормон (ТСГ). До цього сімейства належать гетеродимери, що включають α- і β-субодиницю. Вказані субодиниці утримуються разом за рахунок нековалентної взаємодії. Гетеродимер людського ФСГ (ФСГл) складається з (i) альфа-субодиниці зрілого глікопротеїну з 92 амінокислот, яка буде однаковою і для інших членів цього сімейства людських білків (таких як хоріонічний гонадотропін ("ХГ"), лютеїнізуючий гормон ("LH") і тиреотропний гормон ("ТСГ"); і (ii) β-субодиниці зрілого білка з 111 амінокислот, яка унікальна для ФСГ (Shome et al., 1974 and 1988). Людський гетеродимерний LH складається з (i) альфасубодиниці зрілого глікопротеїну з 92 амінокислот; і (ii) бета-субодиниці зрілого білка з 112 амінокислот, яка унікальна для LH (Keutmann etal., 1979; Talmadge et al., 1984; Fiddes & Talmadge, 1984). Альфа- і бета-субодиниці глікопротеїнів можуть демонструвати тенденцію до дисоціації в складі композицій, як результат їх взаємодії з консервантом, поверхнево-активною речовиною і іншими ексципієнтами. Дисоціація субодиниць веде до втрати біологічної активності (Reichert & Ramsey, 1975). ФСГ використовують у вигляді композиції, приготованої для цілей внутрішньом'язової (в/м) або підшкірної (п/шк.) ін'єкції. ФСГ доступний в ліофілізованій (твердій) формі у флаконах або ампулах з активністю 75 МО/флакон і 150 МО/флакон, термін придатності яких становить приблизно два роки при зберіганні при температурі 2-25°С. Розчин для ін'єкції одержують при 1 UA 101484 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 відновленні ліофілізованого продукту водою для ін'єкції (WFI). Для індукції овуляції або при проведенні контрольованої гіперстимуляції яєчників рекомендуються щоденні ін'єкції початкових доз, що складають від 75 МЕ до 600 МЕ, протягом періоду часу, що досягає приблизно десяти днів. В залежності від відповіді, що досягається у пацієнта, далі можуть бути використані підвищені дози ФСГ в ході лікування, що включає до трьох циклів. У разі використання для введення пацієнту ліофілізованих композицій, необхідно провести відновлення нового флакона з ліофілізованим матеріалом з допомогою розріджувача і потім, відразу після відновлення, вводити на щоденній основі [Package insert N1700101A, опублікований в лютому 1996, для Fertinex™ (урофолітропін для ін'єкцій, очищений) для підшкірної ін'єкції, від компанії Serono Laboratories, Inc., Randolph, MA]. ФСГ був також введений до складу композиції як в однодозовому, так і в багатодозовому варіанті, у вигляді флаконів або ампул. При цьому однодозові варіанти повинні залишатися стабільними і активними при зберіганні, аж до використання. Багатодозові варіанти повинні не тільки залишатися стабільними і активними при зберіганні аж до використання, але повинні також зберігати стабільність, активність і бути відносно вільними від бактерій протягом багатоденного періоду введення, після розкриття запечатаної ампули. З цієї причини, багатодозові варіанти часто містять бактеріостатичну речовину. LH вводять в склад композиції, що підходить для внутрішньом'язової (в/м) або підшкірної (п/шк.) ін'єкції. LH присутній в ліофілізованому (твердому) вигляді у флаконах або ампулах, що містять 75 МО/флакон, з терміном придатності приблизно два роки, в умовах зберігання при температурі 2-25С. Розчин для ін'єкції одержують шляхом відновлення ліофілізованого продукту водою для ін'єкцій (ВДІ). Для індукції овуляції або для досягнення контрольованої гіперстимуляції яєчників, рекомендуються, в поєднанні з ФСГ, щоденні ін'єкції початкових доз від 75 МО до 600 МО LH протягом десяти днів. У ЕР 0 618 808 (Applied Research Systems ARS Holding N.V.) описується фармацевтична композиція, що включає тверду добре перемішену суміш гонадотропіну і стабілізуючої кількості сахарози, однієї або в поєднанні з гліцином. У ЕР 0 814 841 (Applied Research Systems ARS Holding N.V.) описується стабільна рідка фармацевтична композиція, що включає рекомбінантний людський хоріонічний гонадотропін (хоріонічного гонадотропіну людини) і стабілізуючу кількість маніту. У WO 2004/087213 (Ares Trading S.A.) описується рідка і ліофільно висушена фармацевтична композиція, що включає фолікулостимулюючий гормон (ФСГ) або його варіант і/або лютеїнізуючий гормон (LH) або його варіант, а також поверхнево-активну речовину, вибрану з групи, що включає PluronicоF77, Pluronic F87, Pluronic F88 і Pluronic F68. У WO 2004/112826 (Ares Trading S.A.) описується ліофільно висушена композиція, що включає фолікулостимулюючий гормон (ФСГ) або його варіант і лютеїнізуючий гормон (LH) або його варіант, а також поверхнево-активні речовини, вибрані з полісорбату, що включає TWEEN 20, TWEEN 40 і TWEEN 80. У WO 00/04913 (Eli Lilly and Co.) описується композиція, що включає ФСГ або варіант ФСГ, що містить альфа- і бета-субодиницю і консервант, вибраний з групи, що складається з фенолу, м-крезолу, п-крезолу, о-крезолу, хлоркрезолу, бензилового спирту, алкілпарабену (метил-, етил, пропіл-, бутил- і т.п.), хлориду бензалконію, хлориду бензетонію, дегідроацетату натрію і тимеросалу, або їх суміші у водному розріджувачі. У WO 2004/105788 (Ferring B.V.) описується фармацевтична композиція, що складається з ФСГ і хоріонічного гонадотропіну людини, щонайменше в одному фармацевтично прийнятному носії. У ЕР 0 448 146 (AKZO B.V.) описується стабілізований гонадотропін-вмісний ліофілізат, що включає гонадотропін і стабілізуючу кількість солі дикарбонової кислоти. У ЕР 0 853 945 (Akzo Nobel B.V.) описується рідка композиція, що містить гонадотропін, яка відрізняється тим, що дана композиція включає гонадотропін і стабілізуючу кількість полікарбонової кислоти або її солі і тіоефірну сполуку. Однак, все ще залишається потреба в стабільних рідких композиціях LH або варіанту LH, в однодозовій або багатодозовій формі для введення. Короткий опис винаходу Метою даного винаходу є створення рідких композицій LH або варіанту LH, розробка способів їх одержання і способів фармацевтичного або ветеринарного використання при лікуванні розладів фертильності. У першому аспекті, даний винахід стосується рідкої композиції LH або варіанту LH, що включає очищений препарат LH або варіанту LH і стабілізуючу кількість аргініну або його солей і/або лізину або його солей. 2 UA 101484 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У другому аспекті, даний винахід стосується способу одержання рідкої композиції LH або варіанту LH, що включає стадії: а) одержання розчину LH або варіанту LH і b) додавання до вказаного розчину стабілізуючої кількості аргініну або його солей і/або лізину або його солей. У третьому аспекті, даний винахід стосується форми представлення рідкої композиції LH або варіанту LH, що включає рідку композицію за даним винаходом, герметично закриту в стерильних умовах в контейнер, що підходить для зберігання до використання. Вказаний контейнер може являти собою ампулу, флакон, шприц-тюбик або картридж. У четвертому аспекті, даний винахід стосується виробничого виробу, призначеного для використання у разі людини, який включає пакувальний матеріал і контейнер, що містить рідку композицію LH або варіанту LH за даним винаходом і бактеріостатичну речовину, де вказаний пакувальний матеріал включає етикетку, яка вказує, що така композиція може витримуватися протягом двадцяти восьми днів або довше після її першого використання. В іншому своєму аспекті, даний винахід стосується використання рідкої композиції LH або варіанту LH в поєднанні з рідкими композиціями ФСГ або варіанті ФСГ. Короткий опис малюнків На фіг. 1 наведене порівняння хроматографічних профілів (за результатами ГФ-ВЕРХ) композицій р-ЛГл, з використанням різних концентрацій (6, 12 і 24 мкг/мл), контейнерів і при різних об'ємах заповнення (0,25, 0,5 і 1 мл). Вказані композиції містять, крім р-ЛГл, також буфер, сахарозу, TWEEN 80, метіонін, бензиловий спирт, хлорид бензалконію і воду для ін'єкцій. Пунктирні лінії на кресленнях відповідають об'єму 0,25 мл, лінії з точками відповідають об'єму заповнення 0,5 мл і жирні лінії відповідають об'єму заповнення 1 мл. (А) 6 мкг/мл композиції рЛГл в шприці-тюбику. (В) 6 мкг/мл композиції р-ЛГл в картриджі. (С) 12 мкг/мл композиції р-ЛГл в шприці-тюбику. (D) 12 мкг/мл композиції р-ЛГл в картриджі. (Е) 24 мкг/мл композиції р-ЛГл в шприці-тюбику. (F) 24 мкг/мл композиції р-ЛГл в картриджі. Піки продукту з часом утримування 8,5 хвилин відповідають інтактним гетеродимерам (альфа+бета-субодиниці, сполучені через нековалентний зв'язок), а піки з великим часом утримування (9,5 хвилин) відповідають вільним субодиницям. АU означає одиниці поглинання. На фіг. 2 наведене порівняння процентного вмісту гетеродимерів, розраховане за даними ГФ-ВЕРХ при використанні композиції, як такої, що містить, так і такої, що не містить бактеріостатичної речовини, відповідно SAC/500/24gBACL_cart і SAC/500/24g_cart. (А) ГФВЕРХ, проведена через три дні (3д) в умовах зберігання при температурі +40°С. (В) ГФ-ВЕРХ, проведена через вісім днів (8 д), шість тижнів (6 т), вісім тижнів (8 т) і тринадцять тижнів (13 т) в умовах зберігання при температурі +33°С. Докладний опис винаходу Рідкі композиції LH за даним винаходом мають поліпшені або більш прийнятні властивості або стабільність, і застосовні для лікування безпліддя у жінок і/або чоловіків. У переважному варіанті здійснення даного винаходу рідкі композиції, що розглядаються в ньому, призначені для підшкірної і внутрішньом'язової ін'єкції. Прийнятні властивості або стабільність рідких композицій LH або варіанту LH за даним винаходом досягаються за рахунок запобігання зниженню втрати активності або стабільності або за рахунок удосконалення будь-якого такого аспекту, як ефективність або бажаний режим введення, наприклад, щонайменше, шляхом поліпшення характеру композиції з точки зору режиму її введення, частоти введення, дозування, комфортності введення, легкості використання і т.п. Лютеїнізуючий гормон або LH, в контексті даного опису стосується LH, що одержується у вигляді повнорозмірного зрілого білка, який включає, без обмеження, людський LH (ЛГл) і який може бути одержаний по рекомбінантній методиці або може бути виділений з джерел людського походження, таких як сеча жінок в постменопаузі. Вираз «варіант LH» включає такі молекули, які відрізняються по амінокислотній послідовності, характеру глікозилювання або по міжсубодиничному зв'язку від людського LH, але які проявляють властиву LH активність. Термін «активність» застосовно до LH, стосується здатності композиції LH або змішаної композиції проявляти біологічні відповіді, асоційовані з LH, такі як активність, що виявляється по методу підвищення ваги сім’яних пухирців (Van Hell et al., 1964). Біологічна активність LH оцінюється з урахуванням прийнятих стандартів для LH. Ступінь активності виражають в міжнародних одиницях на мілілітр розчину (МО/мл) або в Мега-міжнародних одиницях на мілілітр розчину (ММО/мл). (1ММО/мл=1000000 МО/мл). Міжнародна одиниця розраховується за правилами, наведеними у відповідному каталозі реагентів (Research Reference Reagent Note No. 35), опублікованому Національним Інститутом Здоров'я США (National Institute of Health, Bethesda, Maryland). 3 UA 101484 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 LH або варіант LH може бути одержаний в рамках відповідного методу, наприклад, він може бути одержаний по рекомбінантній методиці, при виділенні або очищенні з природних джерел, як один з можливих варіантів, або шляхом хімічного синтезу, або при використанні будь-якого їх поєднання. Використання терміну «рекомбінантний» стосується препаратів LH або варіантів LH, які одержують при використанні технології рекомбінантних ДНК (див., наприклад, WO 85/01958). Одним прикладом методу експресії LH з використанням рекомбінантної технології є трансфекція еукаріотичних клітин послідовностями ДНК, що кодують альфа- і бета-субодиницю LH, які можуть бути в складі одного вектора або двох векторів, при цьому кожна субодиниця містить окремий промотор, як описано в Європейських патентах No. ЕР 0 211 894 і ЕР 0 487 512. Інший приклад використання рекомбінантної технології для одержання LH включає застосування гомологічної рекомбінації для цілей вбудування гетерологічного регуляторного сегмента в оперативному зв'язку з ендогенними послідовностями, що кодують субодиницю LH, як описано в Європейському патенті No. ЕР 0 505 500 (Applied Research Systems ARS Holding NV). Фолікулостимулюючий гормон, або ФСГ, в контексті даного опису стосується ФСГ, що одержується у вигляді повнорозмірного зрілого білка, який включає, без обмеження, людський ФСГ, або «ФСГл», який може бути одержаний по рекомбінантній методиці або виділений з джерел людського походження, таких як сеча жінок в постменопаузі. Вираз «варіант ФСГ» стосується таких молекул, які відрізняються по амінокислотній послідовності, характеру глікозилювання або по межсубодиничному зв'язку від людського ФСГ, але які демонструють активність ФСГ. Термін «активність», застосовно до ФСГ, стосується здатності композиції ФСГ або змішаної композиції проявляти біологічні відповіді, асоційовані з ФСГ, такі як підвищення ваги яєчників в тесті Стілмана-Полі (Steelman et al., 1953) або ріст фолікул у жінки. Ріст фолікул у жінкипацієнтки можна оцінювати з використанням ультразвуку, наприклад, шляхом визначення кількості фолікул, що мають діаметр, що дорівнює або приблизно дорівнює 16 мм на 8 день стимуляції. Біологічну активність оцінюють з урахуванням прийнятого стандарту для ФСГ. Приклади варіанту ФСГ включають ККП-ФСГ, тривало діючий модифікований рекомбінантний ФСГ, що складається з α-субодиниці дикого типу і гібридної β-субодиниці, в якому карбокси-кінцевий пептид хоріонічного гонадотропіну людини був злитий з С-кінцем βсубодиниці ФСГ, як описано La Polt et al. (1992) або Klein et al. (2003). У це визначення також включається одноланцюговий ККП-ФСГ, що являє собою одноланцюгову молекулу, що складається з наступних послідовностей (від N-кінця до С-кінця): βФСГ βХГл-КПП(113-145) αФСГ де βФСГ означає β-субодиницю ФСГ, βХГл СТР (113-145) означає карбокси-кінцевий пептид хоріонічного гонадотропіну людини і αФСГ означає α-субодиницю ФСГ, як було описано Klein et al. (2002). Інші приклади варіантів ФСГ включають молекули ФСГ, що містять додаткові сайти глікозилювання, включені в α- і/або β-субодиницю, як описано в WO 01/58493 (Maxygen), зокрема, відповідно до описів, наведених в пунктах 10 і 11 в WO 01/58493, а також молекулах ФСГ з міжсубодиничними S-S-зв'язками, як описано в WO 98/58957. ФСГ або варіант ФСГ може бути одержаний за будь-яким прийнятним методом, таким як рекомбінантна технологія, шляхом виділення або очищення з природних джерел, як один з варіантів, або шляхом хімічного синтезу або з використанням будь-якого їх поєднання. ФСГ або варіант ФСГ, що використовується згідно з даним винаходом, може бути одержаний не тільки за допомогою рекомбінантних технологій, що включають застосування клітин ссавців, але також може бути очищений з інших біологічних джерел, таких як сеча. Прийнятні методики включають технології, описані в Hakola et al. (1997), Keene et al. (1989), Cerpa-Poljak et al. (1993), Dias et al. (1994); Flack et al. (1994), Valove et al. (1994), патент США No. 3 119 740 і патент США No. 5767067. Термін «вводити» або «введення» стосується введення композиції за даним винаходом в організм пацієнта, при необхідності лікування у нього захворювання або стану. Термін «пацієнт» означає ссавця, що має потребу в лікуванні захворювання або стану. Вказані пацієнти являють собою, без обмеження, пацієнтів наступного походження: людина, вівця, свиня, кінь, корова, кролик і т.п. Термін «водний розріджувач» стосується рідкого розчинника, який містить воду. Водні системи розчинника можуть складатися тільки з води або можуть складатися з води плюс один або декілька розчинників, що змішуються, і можуть містити розчинені речовини, такі як цукор, 4 UA 101484 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 буфери, солі або інші ексципієнти. Неводні розчинники, що частіше за все використовуються, включають коротколанцюгові органічні спирти, такі як метанол, етанол, пропанол, коротколанцюгові кетони, такі як ацетон, і поліспирти, такі як гліцерин. Термін «ізотонічний агент» являє собою сполуку, яка є фізіологічно толерантною і надає відповідної тонічної властивості композиції для попередження просочення води через клітинні мембрани, що контактують з композицією. Сполуки, такі як гліцерин, звичайно використовують для вказаних цілей у відомих концентраціях. Інші прийнятні ізотонічні агенти включають, без обмеження, амінокислоти або білки (наприклад, гліцин або альбумін), солі (наприклад, хлорид натрію) і цукор (наприклад, декстроза, сахароза і лактоза). Термін «бактеріостатичний» або «бактеріостатична речовина» стосується сполуки або композицій, що додаються як антибактерійний агент до препарату. Консервована композиція, що містить LH або варіант LH за даним винаходом, переважно задовольняє вимогам, встановленим законодавчими або регулюючими органами, що регламентують ефективність консервації, яку повинен мати комерційний прийнятний продукт багаторазового використання, переважно у людей. Приклади бактеріостатиків включають фенол, м-крезол, п-крезол, о-крезол, хлорокрезол, бензиловий спирт, алкілпарабен (метил-, етил-, пропіл-, бутил- і т.п.), хлорид бензалконію, хлорид бензетонію, дегідроацетат натрію і тимеросал. Термін «буфер» або «фізіологічно прийнятний буфер» стосується розчинів сполук, відносно яких відомо, що вони безпечні для фармацевтичного або ветеринарного використання в композиціях і які мають ефект по підтримці або контролю рН композиції в діапазоні значень рН, бажаних для композиції. Прийнятні буфери для цілей контролю значень рН в діапазоні від помірно кислих значень рН до помірно лужних значень рН включають, без обмеження, такі сполуки як фосфат, ацетат, цитрат, аргінін, ТРИС і гістидин. «ТРИС» стосується 2-аміно-2гідроксиметил-1,3-пропандіолу і будь-якої його фармацевтично прийнятної солі. Переважно, вказані буфери включають фосфатні буфери з сольовим розчином або прийнятною сіллю. Термін «фосфатний буфер» стосується розчинів, що містять фосфорну кислоту або її солі, відкоректовані до бажаного значення рН. В основному, фосфатні буфери одержують з фосфорної кислоти або солей фосфорної кислоти, що включає, без обмеження, солі натрію і калію. Деякі солі фосфорної кислоти широко відомі в даній галузі, такі як одноосновні, двоосновні і триосновні натрієві і калієві солі кислоти. Солі фосфорної кислоти також зустрічаються у вигляді гідратів солі. Фосфатні буфери можуть охоплювати певний діапазон рН, зокрема, від приблизно рН 4 до приблизно рН 10, переважні діапазони варіюють від приблизно рН 5 до приблизно рН 9 і найбільш переважний діапазон значень рН складає від приблизно 7,5 до приблизно 8,5, і ще найбільш переважно, складає приблизно рН 8,0. Термін «флакон» або «контейнер» в контексті даного опису стосується широкого переліку резервуарів, що підходять для вміщення в ньому LH і розріджувача в стерильному стані. Приклади флаконів згідно з даним описом включають ампули, картриджі, блістерні упаковки або будь-який інший такого роду резервуар, що підходить для доставки LH пацієнту за допомогою шприца-тюбика, насоса, включаючи (осмотичні), катетера, черезшкірного пластиру, легеневого або трансслизового спрею. Флакони, що підходять для упаковки продуктів з метою парентерального, легеневого, трансслизового або черезшкірного введення, також відомі в даній галузі. Термін «стабільність» стосується фізичної, хімічної і конформаційної стабільності LH в композиціях за даним винаходом (включаючи збереження біологічної активності). Нестабільність білкової композиції може бути викликана хімічною деградацією або агрегацією білкових молекул з утворенням полімерів більш високого порядку, дисоціацією гетеродимерів до мономерів, деглікозилюванням, модифікацією характеру глікозилювання, окисленням (зокрема, α-субодиниці) або будь-якою іншою структурною модифікацією, яка знижує щонайменше тільки одну біологічну активність поліпептиду LH, включеного в композицію за даним винаходом. "Стабільний/а" розчин або композиція, являє собою такий/у розчин або композицію, де ступінь деградації, модифікації, агрегації, втрати біологічної активності і т.п. білків, що входять до їх складу, відповідним чином контролюється і не підвищується з плином часу до неприйнятного рівня. Переважно, вказана композиція зберігає щонайменше 80% або приблизно 80% цільової активності LH протягом періоду часу, що складає до 6 місяців при температурі, що становить 1-10°С або приблизно 1-10°С, більш переважно при температурі 2-8°С або приблизно 2-8°С, більш переважно при температурі 4-5°С або приблизно 4-5°С. Активність LH може бути 6 визначена з використанням біотесту по підвищенню ваги сім’яних пухирців . 5 UA 101484 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Термін "лікування" стосується введення препарату, лікарського спостереження за пацієнтом, ведення пацієнта і/або догляду за пацієнтом, у разі якого бажано введення LH для цілей стимуляції фолікул або функції яєчок або для вияву будь-якої іншої фізіологічної реакції, регульованої LH. Таким чином, лікування може включати, без обмеження, введення LH для цілей індукції утворення сперми або поліпшення якості сперми, стимуляції вивільнення тестостерону у чоловіків, або розвитку фолікул або індукції яєчників у жінок. Вираз "мультидозове використання" в контексті даного опису включає використання однієї ампули, одного флакона або картриджа з композицією LH для проведення більш, ніж однієї, ін'єкції, наприклад, для проведення 2, 3, 4, 5, 6 або більше ін'єкцій. Вказані ін'єкції переважно проводять протягом періоду часу, що складає щонайменше 12 годин, 24 години, 48 годин або приблизно стільки і т.п., переважно протягом періоду часу, що становить 28 днів або приблизно 28 днів. Вказані ін'єкції можуть проводитися з часовими інтервалами, що становлять, наприклад, 6, 12, 24, 48 або 72 години. "Сіль" білка являє собою адитивну сіль основи або кислоти. Такі солі утворюються переважно між однією або декількома зарядженими групами в білці і будь-якими, одним або декількома, фізіологічно прийнятними, нетоксичними катіонами або аніонами. Органічні і неорганічні солі включають, наприклад, такі солі, які були одержані на основі кислот, таких як хлористоводнева, сірчана, сульфонова, винна, фумарова, бромистоводнева, гліколева, лимонна, малеїнова, фосфорна, янтарна, оцтова, азотна, бензойна, аскорбінова, птолуолсульфонова, бензолсульфонова, нафталінсульфонова, пропіонова, вугільна і т.п., або, наприклад, на основі амонію, натрію, калію, кальцію або магнію. Було виявлено, що амінокислота, вибрана з групи, що включає аргінін, лізин або їх суміш, або їх сіль, являє собою прийнятний стабілізуючий агент для одержання стабільної рідкої композиції, що включає LH. У зв'язку з цим, даний винахід в першому своєму аспекті стосується рідкої композиції гонадотропіну, що містить лютеїнізуючий гормон (LH) або його варіант, яка відрізняється тим, що вказана композиція включає стабілізуючу кількість аргініну або його солей і/або лізину і його солей. Стабілізуюча кількість аргініну або його солей і/або лізину і його солей, що міститься в рідкій композиції, описується концентрацією, що складає від 10, точно або приблизно, до 150 мл/мг, точно або приблизно, від всієї композиції, більш переважно, від 20, точно або приблизно, до 60 мг/мл, точно або приблизно. Переважно, концентрація аргініну або його солей складає від 10 мг/мл, точно або приблизно, до 50 мг/мл, точно або приблизно, більш переважно, від 20 мг/мл, точно або приблизно, до 40 мг/мл, точно або приблизно, ще більш переважно, від 25 мг/мл, точно або приблизно, до 35 мг/мл, точно або приблизно, і найбільш переважно, складає точно або приблизно 31,5 мг/мл. Переважно, концентрація лізину або його солей складає від 10 мг/мл, точно або приблизно, до 50 мг/мл, точно або приблизно, більш переважно, від 20 мг/мл, точно або приблизно, до 40 мг/мл, точно або приблизно, ще більш переважно, від 25 мг/мл, точно або приблизно, до 35 мг/мл, точно або приблизно, і найбільш переважно, складає точно або приблизно 28,5 мг/мл. Лютеїнізуючий гормон (LH) в складі рідкої композиції (LH) переважно присутній в концентрації від 1, точно або приблизно, до 50 мкг/мл від всієї композиції. В одному варіанті здійснення даного винаходу, лютеїнізуючий гормон (LH) присутній в концентрації, що складає від 1, точно або приблизно, до 15 мкг/мл, точно або приблизно, від всієї композиції, зокрема, в тому випадку, коли вона призначається для однократного застосування. У ще одному варіанті здійснення даного винаходу, лютеїнізуючий гормон (LH) присутній в концентрації, що складає, точно або приблизно, від 15 до 30 мкг/мл від всієї композиції, зокрема, якщо вона призначена для множинного (багатодозового) використання. Концентрація LH в композиції становить 20 МО/мл, точно або приблизно, до 2000 МО/мл, точно або приблизно, більш переважно, від 50, точно або приблизно, до 1000 МО/мл, точно або приблизно, і особливо переважно від 100 МО/мл, точно або приблизно, до 600 МО/мл, точно або приблизно. Переважно, LH одержують по рекомбінантній технології, особливо переважно, його одержують в клітинах яєчника китайського хом'яка (CHO), трансфікованих одним або декількома векторами експресії, що включають ДНК, яка кодує альфа-субодиницю глікопротеїну людини і бета-субодиницю LH. ДНК, що кодує альфа- і бета-субодиниці, може знаходитися на одному і тому ж векторі або на різних векторах. Рекомбінантний LH має декілька переваг перед відповідним гормоном, що одержується з сечі. Методики культивування і виділення з використанням рекомбінантних клітин дозволяють 6 UA 101484 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 нівелювати відмінності між партіями. Тоді як, навпаки, LH з сечі буде варіювати в значущій мірі від партії до партії по таких показниках, як чистота, характер глікозилювання, сіалілування і окислення субодиниць. У зв'язку з більшою однорідністю партій і чистотою рекомбінантного LH, гормони можуть бути легко ідентифіковані і кількісно визначені за допомогою таких методик, як, наприклад, ізоелектрофокусування (ІЕФ). Та легкість, з якою рекомбінантний LH може бути ідентифікований і кількісно визначений, дозволяє заповнювати флакони на основі маси гормону (наповнення по масі), а не з урахуванням результатів біотестування. Переважно, рідкі композиції за даним винаходом містять буфер, переважно фосфатний буфер, в якому протиіони представлені переважно іонами натрію і калію. Фосфатно-сольові буфери добре відомі в даній галузі, зокрема, широко використовується фосфатно-буферний розчин Дульбекко. Концентрації буфера в загальній масі розчину можуть варіювати і складати, точно або приблизно, 1 мM, 5 мM, 9,5 мM, 10 мM, 50 мM, 100 мМ, 150 мM, 200 мM, 250 мM і 500 мM. Переважно, концентрація буфера складає, точно або приблизно, 10 мM. Особливо переважним є буфер з концентрацією 10 мM по фосфатних іонах і зі значенням pH, що складає, точно або приблизно, 8,0. Переважно, буфер коректують таким чином, щоб рідкі композиції за даним винаходом мали pH від 7,0, точно або приблизно, до 9,0, точно або приблизно, більш переважно, від 7,5, точно або приблизно, до 8,5, точно або приблизно, включаючи такі значення, як pH 7,8, pH 8,0 і рН 8,2. Даний винахід стосується рідких композицій на основі LH або варіанту LH, які можуть бути представлені в однодозовій або багатодозовій формі. Ті рідкі композиції LH, які призначені для багатодозового використання, включають бактеріостатичну речовину, таку як фенол, м-крезол, п-крезол, о-крезол, хлоркрезол, бензиловий спирт, алкілпарабен (метил-, етил-, пропіл-, бутил- і т.п.), хлорид бензалконію, хлорид бензетонію, дегідроацетат натрію і тимеросал. Переважними сполуками є бензиловий спирт, фенол і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію. Бактеріостатична речовина використовується в кількості, яка буде давати концентрацію, ефективну для цілей підтримки даної композиції в стані, по суті позбавленому бактерій (тобто у вигляді, прийнятному для ін'єкцій), протягом всього періоду проведення багатодозових ін'єкцій, який може тривати від 12 до 24 годин або від 12 до 14 днів, точно або приблизно, переважно, від 6 годин до 28 днів, точно або приблизно. Вказана бактеріостатична речовина переважно присутня в композиції в концентрації, що складає від 0,005 до 15 мг/мл, точно або приблизно, і більш переважно, від 0,01 до 12 мг/мл, точно або приблизно. Вказана бактеріостатична речовина переважно присутня в композиції в концентрації, що дорівнює, точно або приблизно, від 0,1% (маса бактеріостатика/маса розчинника) до 2,0%, точно або приблизно, і більш переважно, від 0,2% до 1,0%, точно або приблизно. У разі використання бензилового спирту, особливо переважна концентрація 0,9% або 1,2%. У разі використання фенолу, особливо переважна концентрація, що становить 0,5%, точно або приблизно. У разі використання поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію, особливо переважна концентрація 0,3% і 0,001%, відповідно. Переважно, композиції за даним винаходом містять антиоксидант, такий як метіонін, бісульфіт натрію, солі етилендіамінтетраоцтової кислоти (ЕДТА), бутильований гідрокситолуол (БГТ) і бутильований гідроксіанізол (БГА). Найбільш переважний метіонін. Антиоксидант перешкоджає окисленню LH (особливо α-субодиниці). Антиоксидант, наприклад, метіонін, присутній в концентрації, що складає від 0,01 до 5,0 мг/мл, точно або приблизно, і більш переважно, від 0,05 до 0,5 мг/мл, точно або приблизно. Переважно, композиції за даним винаходом містять поверхнево-активну речовину. Переважно, вказану поверхнево-активну речовину вибирають з групи полісорбатів, зокрема, являє собою TWEEN 20 (поліоксіетилен (20) сорбітанмонолаурат), TWEEN 40 (поліоксіетилен (20) сорбітанмонопальмітат) і TWEEN 80 (поліоксіетилен (20) сорбітанмоноолеат). Найбільш переважним є TWEEN 20, переважно в концентрації, що складає від 0,01 до 10 мг/мл, точно або приблизно. У переважному варіанті здійснення даного винаходу композиції, що розглядаються в ньому, включають щонайменше 25 мкг/мл r-ЛГл, 1,65 мг/мл Na2HPО4 2H2О, 0,104 мг/мл NaH2PО4 H2О, 31,5 мг/мл моногідрохлориду аргініну, 0,05 мг/мл TWEEN 20, 0,5 мг/мл метіоніну і 5 мг/мл фенолу. В іншому переважному варіанті здійснення даного винаходу композиції, що розглядаються в ньому, включають щонайменше 25 мкг/мл r-ЛГл, 1,65 мг/мл Na2HPО4 2H2О, 0,104 мг/мл NaH2PО4 H2О, 28,5 мг/мл моногідрохлориду лізину, 0,05 мг/мл TWEEN 20, 0,5 мг/мл метіоніну і 12 мг/мл бензилового спирту. 7 UA 101484 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 В іншому переважному варіанті здійснення даного винаходу композиції, що розглядаються в ньому, включають щонайменше 25 мкг/мл r-ЛГл, 1,65 мг/мл Na2HPО4 2H2О, 0,104 мг/мл NaH2PО4 H2О, 28,5 мг/мл моногідрохлориду лізину, 0,05 мг/мл TWEEN 20, 0,5 мг/мл метіоніну, 3 мг/мл бензилового спирту і 0,01 мг/мл хлориду бензалконію. У переважному варіанті, даний винахід стосується рідкої фармацевтичної композиції для багатодозового використання, що включає LH або варіант LH, стабілізуючий агент, вибраний з групи, що складається з аргініну, лізину або їх суміші, або їх солі, а також бактеріостатичну речовину, вибрану з групи, що включає бензиловий спирт, фенол і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію. В іншому переважному варіанті, даний винахід стосується способу виробництва рідкої фармацевтичної композиції для багатодозового використання, що включає одержання водного розчину, що містить LH або варіант LH, стабілізуючий засіб, вибраний з групи, що складається з аргініну, лізину або їх суміші, або їх солі, а також бактеріостатичну речовину, вибрану з групи, що включає бензиловий спирт, фенол і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію і WFI (вода для ін'єкцій). В іншому переважному варіанті, даний винахід стосується способу виробництва упакованої фармацевтичної композиції, що включає пристрій для розливання розчину, що містить LH або варіант LH, стабілізуючий засіб, вибраний з групи, що складається з аргініну, лізину або їх суміші, або їх солі, а також бактеріостатичну речовину, вибрану з групи, що включає бензиловий спирт, фенол і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію. У ще одному переважному варіанті, даний винахід стосується виробничого виробу фармацевтичного призначення для використання людиною, який містить флакон з розчином, що включає LH або варіант LH, стабілізуючий засіб, вибраний з групи, що складається з аргініну, лізину або їх суміші, або їх солі, а також бактеріостатичну речовину, вибрану з групи, що включає бензиловий спирт, фенол і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію, а також етикетку, на якій указано, що такий розчин може зберігатися, точно або приблизно, протягом двадцяти чотирьох годин або більше, після першого використання. Переважно, на етикетці вказується, що вказаний розчин може зберігатися, точно або приблизно, протягом 12 або 14 днів після першого використання. До першого використання, тобто до розкриття ампули або картриджа, композиції за даним винаходом можуть зберігатися, точно або приблизно, протягом 6 місяців, 12 місяців або 24 місяців. При додержанні переважних умов зберігання, до моменту першого використання, композиції зберігають вдалині від яскравого світла (переважно в темряві), при температурах, що складають, точно або приблизно, 2-8°С, більш переважно, точно або приблизно, 4-5°С. Як вказувалося вище, даний винахід стосується рідких композицій LH або варіанту LH для однократного і багатодозового використання, що містить бактеріостатик. Композиції за даним винаходом підходять для фармацевтичного або ветеринарного застосування. Як вказувалося вище, в переважному варіанті свого здійснення, даний винахід стосується виробничого виробу, що включає пакувальний матеріал і флакон з розчином, що включає LH або варіант LH, стабілізуючий засіб, вибраний з групи, що складається з аргініну, лізину або їх суміші, або їх солі, а також бактеріостатичну речовину, вибрану з групи, що включає бензиловий спирт, фенол і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію, необов'язково при наявності буферів і/або інших ексципієнтів, у водному розріджувачі, де вказаний пакувальний матеріал включає етикетку, де вказується, що такий розчин може зберігатися, точно або приблизно, протягом двадцяти чотирьох годин або більше, після першого використання. Переважно, композиції за даним винаходом зберігають щонайменше, точно або приблизно, 80% від активності LH, що була на момент упаковування, протягом 24 місяців (до першого використання). Активність LH може бути визначена з допомогою біотесту на підвищення ваги 5 сім’яних пухирців . Композиції за даним винаходом можуть бути одержані в рамках способу, який включає змішування LH або варіанту LH і стабілізуючої кількості аргініну або його солей і/або лізину або його солей, а також необов'язково бактеріостатичної речовини, вибраної з бензилового спирту, фенолу і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію, у вигляді твердих речовин, або розчинення LH або варіанту LH і стабілізуючої кількості аргініну або його солей і/або лізину або його солей, а також необов'язково бактеріостатичної речовини, вибраної з бензилового спирту, фенолу і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію у водному розріджувачі. Змішування компонентів і розчинення їх у водному розріджувачі проводять з використанням стандартних методик розчинення і змішування. Для одержання відповідної композиції, наприклад, певну кількість LH або варіанту LH в буферному розчині об'єднують з аргініном або 8 UA 101484 C2 5 10 15 20 25 30 35 його солями і/або лізином або його солями і необов'язково з бактеріостатичною речовиною, вибраною з бензилового спирту, фенолу і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію, в буферному розчині, в кількостях, достатніх для одержання білка, аргініну або його солей і/або лізину або його солей і необов'язково бактеріостатика в бажаних концентраціях. Одержаний розчин потім розливають у флакони, ампули або картриджі. Різні варіації цього процесу відомі фахівцям в даній галузі. Так, наприклад, порядок додавання компонентів, якщо використовуються допоміжні речовини, значення температури і pH, при яких виготовляється композиція, являють собою чинники, які можуть бути оптимізовані застосовно до даної концентрації і режимів введення, що використовуються. У переважному варіанті, композиції за даним винаходом виготовляють шляхом одержання концентрованих розчинів з відомою концентрацією всіх компонентів даної композиції (наприклад, натрій-фосфатний буфер, аргінін і/або його солі, лізин і/або його солі, TWEEN 20, метіонін, LH) і потім відбору аліквоти точних об'ємів з утворенням "маточного розчину" такого ж складу, як і готова композиція. Далі "маточний розчин" переважно фільтрують через PDF мембрану Duroporeо (Millipore) з розміром пір 0,22 мікрона, для видалення мікроорганізмів, після чого аліквоти вносять в окремі контейнери, такі як флакони, ампули або картриджі. Композиції за даним винаходом можуть використовуватися в поєднанні з композиціями, що включають ФСГ або варіант ФСГ (наприклад, Gonal-F®). Композиції за даним винаходом можуть бути введені з використанням відомих в практиці пристроїв. Приклади таких одноразових систем введення з флаконом включають шприци-ручки для доставки, такі як EasyJect®, Gonal-F® Pen, Humaject®, NovoPen®, B-DоPen, AutoPen® і OptiPen® Продукти, заявлені в даному описі, включають пакувальний матеріал. При цьому, пакувальний матеріал містить, крім інформації, необхідної за правилами регламентуючих органів, також вказівку про стани, при яких даний продукт може використовуватися. У разі форми представлення продукту у вигляді розчину в складі одного флакона, є етикетка, де вказується, що такий розчин може зберігатися після першого використання протягом двадцяти чотирьох годин або довше, переважно, протягом періоду часу, що становить 12 або 14 днів. Заявлені в даному описі продукти призначені для використання людиною як фармацевтичного продукту. Наведені нижче приклади дані для подальшої ілюстрації способів одержання препаратів і композицій за даним винаходом. При цьому, область даного винаходу не обмежується наведеними прикладами, які потрібно трактувати лише як додаткове пояснення. Приклади Матеріали Компонент r-ЛГл, об'ємна форма L-аргінін monohydrochloride Хлорид бензалконію Бензиловий спирт М-крезол L-гліцин Моногідрохлорид L-лізину Meтіонін Фенол Ортофосфорна кислота 85%(ЄврФарм, ВР, NF) (Ph Eur, BP, NF) Гідроксид натрію Дігідрат гідрофосфату динатрію Моногідрат дигідрофосфату натрію Безводний сульфат натрію Сорбіт Сахароза Трегалоза TWEEN 20 Вода Виробник Laboratoires Serono SA Merck code 1.01544 Fluka code 12063 Merck code 1.00987 Merck code 8.09691 Merck code 5.00190 Merck code 1.05701 Merck code 1.05707 Merck code 1.00200 Merck code 1.00563 Merck code 1.06498 Merck code 1.06580 Merck code 1.06346 Merck code 1.006649 Sigma code S-1876 Merck code 1.07653 Merck code 1.08216 Merck code 8.22184 milliQ Нижче наведені параметри, які оцінювалися при аналізі великого числа композицій: 9 UA 101484 C2 5 10 15 20 аналіз стабілізуючих і/або бактеріостатичних засобів; сумісність з композиціями ФСГ; сумісність з первинною упаковкою; профіль стабільності після зберігання. Композиції, що розглядаються, являли собою рідкі однодозові і багатодозові композиції. Оцінювали наступні шість стабілізуючих засобів: моногідрохлорид L-аргініну (ARG або аргінін в прикладах); моногідрохлорид L-лізину (LYS або лізин в прикладах); трегалоза (TRE); L-гліцин (GLY або гліцин в прикладах); сахароза (SAC); сорбіт (SOR). Оцінювали вказані нижче чотири бактеріостатичних речовини для багатодозових композицій: бензиловий спирт (BA); м-крезол (mCr); фенол (Phe); поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію (BACL). Приклад 1 - Дослідження стабілізуючих засобів для багатодозових композицій Проводили тестування шести стабілізуючих засобів (сахароза, аргінін, гліцин, лізин, сорбіт і трегалоза) з точки зору їх здатності доставляти стабільні монодозові композиції. Проаналізовані таким чином композиції представлені в узагальненому вигляді в таблиці 1. Таблиця 1 Склад декількох однодозових композицій р-ЛГл, що містять різні стабілізуючі засоби Компоненти Amount/мл р-ЛГл, об’ємн. Na2HPО4 2H2О Na2HPО4 2H2О Метіонін TWEEN 20 Сахароза Аргінін Гліцин Лізин Сорбіт Трегалоза WFI SAC/250 ARG/250 GLY/250 LYS/250 SOR/250 TRE/250 6 мкг 1,65 мг 6 мкг 1,65мг 6 мкг 1,65 мг 6 мкг 1,65 мг 6 мкг 1,65 мг 6 мкг 1,65 мг 0,104 мг 0,104 мг 0,104 мг 0,104 мг 0,104 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 105 мг q.s. до 1мл 250 мкг 50 мкг 33 мг q.s. до 1мл 250 мкг 50 мкг 23 мг q.s. до 1мл 250 мкг 50 мкг 28 мг q.s. до 1мл 250 мкг 50 мкг 56,5 мг q.s. до 1мл 250 мкг 50 мкг 106 мг q.s. до 1мл q.s. = достатня кількість 25 30 Готують кожний з розчинів, приблизно по 40 мл, фільтрують через мембрану з розміром пор 0,22 мкм в контейнер з нержавіючої сталі об'ємом 22 і далі зберігають при температурі 2-8°С, +25°С і +40°С в пластикових пробірках об'ємом 15 мл. Розчини аналізують на вміст білка (по ГФ-ВЕРХ), окислених форм (по ЗФ-ВЕРХ), агрегатів (по ГФ-ВЕРХ) і утворення субодиниц (кількісно, по ГФ-ВЕРХ) протягом періоду часу до 1 місяця. Результати тестів, проведених на повній панелі, застосовно до даного набору композицій, показані в таблицях 2-5. 10 UA 101484 C2 5 На основі одержаних результатів, були вибрані сахароза, лізин і аргінін як кращі ексципієнти для проведення подальших досліджень їх сумісності із зростаючими кількостями метіоніну (250 мкг/мл і 500 мкг/мл), що використовується як антиоксидант. Склад досліджених розчинів наведений в таблиці 6. Слід зазначити, що ці розчини були одержані ex novo. 11 UA 101484 C2 5 10 Готують кожний з розчинів, приблизно по 100 мл, фільтрують через мембрану з розміром пор 0,22 мкм в контейнер з нержавіючої сталі об'ємом 22 мл і потім вводять для заповнення в скляні шприци-тюбики об'ємом 1 мл для тестування також сумісності між лікарською речовиною і контейнером для готового продукту (шприц-тюбик на 1 мл + поршень). Шприци-тюбики зберігають при температурах 2-8°С, +25°С, +33°С і +40°С. Умови зберігання при температурі +33°С були введені для тестування, з тим щоб мати компромісні умови між дуже швидкою (+40°С) і дуже низькою (+25°С) кінетикою деградації продукту. Розчини далі аналізували на вміст р-ЛГл (за даними ГФ-ВЕРХ), окислених форм (за даними ГФ-ВЕРХ), агрегатів (за даними ГФ-ВЕРХ), для оцінки утворення субодиниць (кількісно, по методу ГФ-ВЕРХ), аж до 2-3 місяців. Результати тестів, проведених на повній панелі, застосовно до даного набору композицій, описаних в таблиці 6, показані в таблицях 7-11. Таблиця 7 Чистота препаратів за даними ГФ-ВЕРХ (зберігання при температурі: +40°C) Композиція % гетероди-мерів T=4d SAC/250 ARG/250 LYS/250 SAC/500 ARG/500 LYS/500 T=0 99,12 98,30 98,59 99,34 98,41 98,72 38,98 9,16 18,27 33,96 13,49 29,07 % вільних субодиниць T=0 T=4d — — — — — — 60,29 90,03 81,02 64,11 85,94 69,89 w = тижні 15 12 % агрегатів T=0 T=4d 0,89 1,70 1,41 0,66 1,591,22 0,74 0,83 0,72 1,93 0,57 1,05 % гетероди-мерів (2-8°C) T=0 T=13w 99,12 98,30 98,59 99,34 98,41 98,72 97,96 99,23 99,69 98,66 99,36 99,68 UA 101484 C2 Таблиця 8 Чистота препаратів за даними ГФ-ВЕРХ (зберігання при температурі: +40°C) Композиція SAC/250 ARG/250 LYS/250 SAC/500 ARG/500 LYS/500 Композиція SAC/500 ARG/500 LYS/500 Композиція SAC/250 ARG/250 LYS/250 SAC/500 ARG/500 LYS/500 T=0 99,12 98,30 98,52 T=0 99,12 98,30 T=0 99,34 98,41 98,72 % гетеродимерів T=6d T=4w T=6w 69,75 65,46 64,82 65,03 39,69 37,00 74,96 53,95 46,28 T=6d T=4w T=6w 69,75 65,46 64,82 65,03 39,69 37,00 % гетеродимерів T=6d T=4w T=6w 71,26 43,14 27,77 67,04 38,04 32,62 74,03 52,81 49,17 T=0 0,89 1,70 1,41 0,66 1,59 1,22 T=6d 1,01 2,77 1,45 1,63 1,83 1,09 % ВІЛЬНИХ СУБОДИНИЦЬ T=0 T=6d T=4w T=6w T=8w — 29,25 46,04 32,49 n.a. — 32,20 58,05 61,22 63,90 — 23,59 44,42 52,58 55,09 T=0 T=6d T=4w 52,34 n.a. — 29,25 46,04 65,37 70,81 — 32,20 58,05 49,04 53,24 % вільних субодиниць T=8w T=0 T=6d T=4w T=6w T=8w n.a. — 27,12 50,74 52,34 n.a. 25,34 — 31,14 58,48 65,37 70,81 43,88 — 24,88 45,07 49,04 53,24 % агрегатів T=4w T=6w T=8w n.a. 2,70 n.a. 2,26 1,79 4,74 1,64 1,14 1,69 19,90 6,12 n.a. 3,48 2,02 3,86 2,12 1,79 2,85 T=8w n.a. 31,37 43,23 T=8w n.a. 31,37 Таблиця 9 Чистота препаратів за даними ГФ-ВЕРХ (зберігання при температурі: +25°C) Композиція SAC/250 ARG/250 LYS/250 SAC/500 ARG/500 LYS/500 % гетеродимерів T=0 99,12 98,30 98,59 99,34 98,41 98,72 T=4w 98,36 79,80 84,15 n.a. n.a. n.a. T=8w 76,81 73,39 77,60 61,24 69,45 78,56 % ВІЛЬНИХ СУБОДИНИЦЬ T=0 T=4w T=8w — — 21,05 — 17,89 23,99 — 13,78 21,23 — n.a. 33,50 — n.a. 27,93 — n.a. 19,81 % агрегатів T=0 0,89 1,70 1,41 0,66 1,59 1,22 T=4w 1,65 2,32 n.a. n.a. n.a. n.a. T=8w 2,15 2,63 1,18 5,26 2,63 1,64 Таблиця 10 % окислених форм за даними ЗФ-ВЕРХ Композиція SAC/250 SAC/500 ARG/250 ARG/500 LYS/250 LYS/500 4 дні (+40°C) 6,13 17,37 6,29 4,69 5,24 3,25 8 тижнів (+25°C) 7,32 35,78 5,96 5,67 5,05 4,02 5 13 4 тижні (+33°C) 9,72 39,12 9,72 6,69 8,00 5,71 6 тижнів (+33°C) 20,13 45,93 7,02 8,10 8,63 6,84 UA 101484 C2 Таблиця 11 Вміст р-ЛГл, за даними ГФ-ВЕРХ Композиція SAC/250 SAC/500 ARG/250 ARG/500 LYS/250 LYS/500 5 10 15 T=0 5,03 6,27 5,90 5,00 6,14 6,08 T=4 дні (+40°C) 3,09 4,92 3,74 3,36 4,54 3,91 T=8 тижнів (+25°C) 5,09 6,00 5,50 4,25 5,74 5,61 T=4 тижнів (+33°C) 5,31 5,96 5,63 5,05 5,83 5,73 T=6 тижнів (+33°C) 4,74 5,63 5,34 n.a. 5,58 5,49 T=8 тижнів (+33°C) n.a. 6,20 5,17 n.a. 5,84 5,48 Згідно з одержаними результатами, сахароза демонструє більш високу сумісність з 250 мкг/мл метіоніну, лізин з 500 мкг/млм метіоніну і аргінін з обома концентраціями метіоніну. Приклад 2 - Сумісність однодозових рідких композицій р-ЛГл з багатодозовою рідкою композицією ФСГ З урахуванням результатів, наведених в прикладі 1, змішують композиції, описані в таблиці 6, з композицією ФСГ (наприклад, з багатодозовою рідкою композицією Gonal-F®) і проводять їх тестування після 24-годинного контакту при температурі 25°С в рамках вказаних нижче методів: - ЗФ-ВЕРХ для оцінки окислених форм αr-субодиниці ФСГл і р-ЛГл (в таблиці 12 показаний % чистоти відносно неокислених форм); - ГФ-ВЕРХ для кількісної оцінки рівня агрегатів; - ЗФ-ВЕРХ для визначення титру р-ФСГл і р-ЛГл; - бітест in vivo для оцінки р-ФСГл і р-ЛГл; - SDS-PAGE для кількісного визначення вільних субодиниць і агрегатів р-ФСГл і р-ЛГл (дані не наведені); - дані візуального огляду. Одержані результати наведені в таблицях 12-14. Таблиця 12 Чистота за даними аналізу в ЗФ-ВЕРХ і % агрегатів за даними аналізу в ГФ-ВЕРХ Композиція SAC/250 ARG/250 LYS/250 SAC/500 ARG/500 LYS/500 % чистоти T=0 98,53 97,29 97,81 98,50 97,75 97,04 T=24 h 98,61 99,17 97,73 98,17 97,47 96,74 T=0 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 % агрегатів T=24 h 0,00 0,72 0,37 0,39 0,69 0,33 h = години 20 Таблиця 13 Вмісти ФСГ і LH Композиція SAC/250 ARG/250 LYS/250 SAC/500 ARG/500 LYS/500 Вміст р-ФСГл* content* T=0 T=24h 16,14 16,14 15,45 16,01 15,35 15,68 16,29 16,91 16,03 15,80 15,46 15,69 * ФСГ, теоретичний вміст: 200 МО=15,48 мкг/мл; #LH, теоретичний вміст: 100 МО=4 мкг/мл 14 Вміст р-ЛГл # T=0 T=24h 3,67 3,61 4,15 4,21 4,07 4,15 3,71 3,70 4,15 4,05 4,05 4,17 UA 101484 C2 Таблиця 14 Біотест Композиція SAC/250 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Активність р-ФСГл T=0 T=24 ч 174,60 183,70 Активність р-ЛГл T=0 T=24 ч 108.00 109,00 Всі досліджені однодозові композиції були сумісні з багатодозовою композицією Gonal-F®, оскільки було показано: - відсутність втрати у вмісті ФСГ і LH; - відсутність окислення; - відсутність агрегації і дисоціації до вільних субодиниць (по даним SDS-PAGE); - відсутність втрати в біологічній активності LH і ФСГ. Приклад 3 - Дослідження стабільності однодозових рідких композицій З урахуванням результатів, наведених в попередніх прикладах, були одержані композиції, описані в таблиці 6, за винятком тих, які містять аргінін, з двома різними концентраціями р-ЛГл (6 мкг/мл і 12 мкг/мл), які далі зберігали при температурі 2-8°С і +25°С і потім тестували в жорстких умовах зберігання, в рамках наведених нижче методів аналізу: - ЗФ-ВЕРХ для оцінки вмісту LH; - ЗФ-ВЕРХ для оцінки окислених форм α-субодиниць; - SDS-PAGE для оцінки рівня вільних субодиниць і агрегатів; - біотест; - pH розчину; - візуальна оцінка. За допомогою програмного забезпечення Stabileo 1.1 проводили статистичний аналіз результатів визначення всіх параметрів, ідентифікованих як пов'язані зі стабільністю. Концентрація р-ЛГл (по даним ЗФ-ВЕРХ) в умовах зберігання при температурах 2-8°С і 25±2°С Не було виявлено втрати концентрації білка в композиціях після 6-місячного зберігання при температурах 2-8°С, застосовно до концентрації р-ЛГл (6 мкг/мл і 12мкг/мл). Після 6 місяців зберігання при температурі 25±2°С спостерігалося сумарне зниження вказаної концентрації на рівні 0,4 мкг/місяць. Біологічна активність р-ЛГл (за даними біотесту) в умовах зберігання при температурах 28°С і 25±2°С Не спостерігалася релевантна втрата біологічної активності досліджених композицій після 6місячного зберігання при температурах 2-8°С і 25±2°С, застосовно до концентрації р-ЛГл (6 мкг/мл і 12 мкг/мл). % субодиниць і агрегатів за даними SDS-PAGE Процентний вміст агрегатів, по даним SDS-PAGE, зберігається на рівні менше за 2% у разі обох концентрацій після 6-місячного зберігання при температурах 2-8°С і 25°С. Тоді як в умовах зберігання при температурах 25°С±2°С через 6 місяців спостерігається сумарне зниження на рівні приблизно 5%/місяць. % окислених форм за даними ЗФ-ВЕРХ Відмічається збільшення кількості окислених форм на рівні 0,4%/місяць після 6-місячного зберігання при температурах 2-8°С і їх підвищення в діапазоні 0,6-1,.4%/місяць в умовах зберігання при температурі 25°С±2°С. Значення pH і результати візуального огляду Не відмічалося змін зовнішнього вигляду композицій при їх візуальному огляді (колір, прозорість, видимі частинки), а також яких-небудь відхилень в значеннях pH, що визначаються як в ході виробництва, так і при зберіганні. Приклад 4 - Сумісність стабілізуючих і бактеріостатичних засобів для багатодозових композицій Досліджували шість стабілізуючих засобів (сахароза, аргінін, гліцин, лізин, сорбіт і трегалоза) з точки зору їх сумісності з бактеріостатичними засобами для цілей доставки стабільних багатодозових композицій. Досліджені композиції наведені в сумарному вигляді в таблиці 15. 15 UA 101484 C2 Таблиця 15 Склад декількох багатодозових композицій р-ЛГл, що містять різні поєднання стабілізуючих і бактеріостатичних засобів Компоненти кількість/мл р-ЛГл, об’ємн. Na2HPО4 2H2О NaH2PО4 H2О Meтіонін TWEEN 20 Сахароза Аргінін Бензиловий спирт м-крезол Фенол WFI Компоненти кількість/мл р-ЛГл, об’ємн. Na2HPО4 2H2О NaH2PО4 H2О Meтіонін TWEEN 20 Лізин Сорбіт Бензиловий спирт м-крезол Фенол WFI LYS/250 BA Компоненти кількість/мл р-ЛГл, об’ємн. Na2HPО4 2H2О NaH2PО4 H2О Meтіонін TWEEN 20 Гліцин Трегалоза Бензиловий спирт м-крезол Фенол WFI 5 SAC/250 BA GLY/250/ BA 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 105 мг 0,90% SAC/250 mCr 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 105 мг SAC/250 Phe 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 105 мг 0,30% 0,50% q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 28 мг 0,90% LYS/250m Cr 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 28 мг LYS/250 Phe 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 28 мг 0,30% 0,50% q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 23 мг 0,90% GLY/250/ mCr 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 23 мг GLY/250/ Phe 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 23 мг 0,30% 0,50% q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл ARG/250 BA 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 33 мг 0,90% ARG/250 mCr 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 33 мг ARG/250 Phe 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 33 мг q.s. до 1 мл SOR/250 BA 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 56,5 мг 0,90% 0,30% 0,50% q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл TRE/250/ BA 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 106 мг 0,90% 0,30% 0,50% q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл l TRE/250/ TRE/250/ mCr Phe 25 мкг 25 мкг 1,65 мг 1,65 мг 0,104 мг 0,104 мг 250 мкг 250 мкг 50 мкг 50 мкг 106 мг 106 мг q.s. до 1 мл 0,30% 0,50% q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл SOR/250 mCr 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 56,5 мг SOR/250 Phe 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 250 мкг 50 мкг 56,5 мг Готують розчини, кожний по 40 мл, фільтрують через мембрану з розміром пор 0,22 мкм і зберігають при температурі 2-8°С, +25°С і +40°С в пластикових пробірках об'ємом 15 мл. Далі розчини аналізують на вміст білка (по методу гель-фільтрації-ВЕРХ, ГФ-ВЕРХ, дані не показані), на рівень окислених форм (по методу ВЕРХ із звертанням фази, ЗФ-ВЕРХ), агрегатів (по ГФВЕРХ) і для оцінки утворення субодиниць (кількісно, по ГФ-ВЕРХ) протягом періоду часу до 1 місяця. Результати повного набору тестів, проведених на всій сукупності композицій, що досліджуються, наведені в таблицях 16-18. Всі розчини, що містять м-крезол (mCr), стають 16 UA 101484 C2 опалесцуючими навіть відразу після виробництва, в зв'язку з несумісністю бактеріостатика і поверхнево-активної речовини (TWEEN 20). Таблиця 16 Чистота продукту за даними ГФ-ВЕРХ (зберігання при температурі: +40°C) Композиція SAC/250/mCr SAC/250/BA SAC/250/Phe GLY/250/mCr GLY/250/BA GLY/250/Phe ARG/250/mCr ARG/250/BA ARG/250/Phe Композиція LYS/250/mCr LYS/250/BA LYS/250/Phe SOR/250/mCr SOR/250/BA SOR/250/Phe TRE/250/mCr TRE/250/BA TRE/250/Phe % гетеродимерів T=1d T=4d T=0 98,91 89,61 52,93 95,50 74,04 51,52 98,34 74,20 67,13 97,95 96,54 86,76 96,08 59,58 41,59 96,49 74,71 86,06 97,94 70,34 44,39 91,44 35,99 15,91 95,31 63,27 29,12 % гетеродимерів T=1d T=4d T=0 98,19 81,57 65,68 94,75 47,94 33,61 97,91 72,68 56,73 90,46 86,33 58,78 94,08 62,71 45,27 94,74 70,58 55,75 86,07 77,26 40,60 94,74 69,53 42,19 91,05 85,29 54,89 % вільних субодиниць T=0 T=1d T=4d — n.a. 23,67 — 22,65 45,12 — 19,63 23,71 — 9,55 n.a. — 37,82 56,45 — 20,01 9,22 — 28,39 53,33 — 58,99 79,65 — 33,75 67,18 % вільних субодиниць T=0 T=1d T=4d — — — — — — — — — 17,99 48,59 26,18 n.a. 64,17 22,30 n.a. 21,36 n.a. 33,10 63,14 42,26 18,87 47,22 32,7620,87 44,22 24,28 T=0 % агрегатів T=1d T=4d 1,10 4,50 1,66 2,05 3,92 2,51 2,06 8,57 4,69 23,41 3,36 9,17 n.a. 1,97 4,73 2,29 4,45 3,70 10,38 3,33 5,57 3,14 2,61 5,28 1,29 5,03 2,98 % агрегатів T=0 T=1d 1,81 5,26 2,09 9,55 5,93 5,26 13,93 5,26 8,95 n.a. 3,48 1,16 13,68 3,13 7,13 22,74 9,12 14,72 T=4d 1,22 3,26 1,01 22,36 7,52 11,50 38,53 12,88 20,83 Таблиця 17 Чистота продукту за даними ГФ-ВЕРХ (зберігання при температурі: +25°C Композиція SAC/250/mCr SAC/250/BA SAC/250/Phe GLY/250/mCr GLY/250/BA GLY/250/Phe ARG/250/mCr ARG/250/BA ARG/250/Phe LYS/250/mCr LYS/250/BA LYS/250/Phe SOR/250/mCr SOR/250/BA SOR/250/Phe TRE/250/mCr TRE/250/BA TRE/250/Phe % гетеродимерів T=7d T=1M T=0 98,91 53,76 69,30 95,50 95,04 75,84 98,34 93,82 85,49 97,95 97,00 95,39 96,08 97,63 68,21 96,49 97,44 93,19 97,94 98,73 78,33 91,44 97,38 79,79 95,31 98,33 82,18 98,19 98,28 95,38 94,75 97,39 82,54 97,91 99,55 98,61 90,46 82,65 64,24 94,08 95,93 68,59 94,74 92,55 81,96 86,07 75,78 45,61 94,74 91,22 67,28 91,05 84,53 66,79 % вільних субодиниц T=0 T=7d T=1M — — — — — — — — — — — — — — — — — — 17 31,19 — — — — — — — — — — — — — — — — — 15,13 14,66 — — 28,42 — 19,73 18,91 16,59 — 14,66 — — 21,99 — — 13,75 — T=0 1,10 4,50 1,66 2,05 3,92 2,51 2,06 8,57 4,69 1,81 5,26 2,09 9,55 5,93 5,26 13,93 5,26 8,95 % агрегатів T=7d T=1M 14,34 4,96 6,18 3,00 2,37 2,57 1,28 2,63 1,67 1,73 2,61 0,46 17,23 4,08 7,46 24,23 8,79 15,47 15,57 9,50 14,51 4,62 2,17 6,10 1,94 1,31 1,23 4,27 2,80 1,40 35,76 9,43 18,05 54,40 18,97 33,22 UA 101484 C2 Taблиця 18 % окислених форм за даними ЗФ-ВЕРХ Композиція SAC/250/mCr SAC/250/BA SAC/250/Phe GLY/250/mCr GLY/250/BA GLY/250/Phe ARG/250/mCr ARG/250/BA ARG/250/Phe LYS/250/mCr LYS/250/BA LYS/250/Phe SOR/250/mCr SOR/250/BA SOR/250/Phe TRE/250/mCr TRE/250/BA TRE/250/Phe 5 12 днів (+40°C) 51,14 14,07 25,55 59,29 10,53 34,86 65,27 7,12 15,49 44,05 13,69 56,55 58,29 13,51 30,78 45,84 19,12 23,87 1 місяць (+25°C) 16,62 8,83 17,54 5,43 4,44 16,06 3,13 5,65 11,27 16,36 9,30 17,86 25,68 8,49 17,75 26,36 11,41 27,76 На основі одержаних результатів, були вибрані сахароза, лізин і аргінін, як кращі стабілізуючі засоби, для їх подальшого дослідження з точки зору сумісності з підвищеною кількістю метіоніну (500 мкг/мл). Бензиловий спирт, фенол і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію були вибрані як бактеріостатичні засоби. Досліджені композиції описані в узагальненому вигляді в таблиці 19. Таблиця 19 Склад декількох багатодозових композицій р-ЛГл, що містять вибрані стабілізуючі засоби і різні бактеріостатичні засоби Компоненти кількість/мл р-ЛГл, об’ємн. Na2HPО4 2H2О NaH2PО4 H2О Meтіонін TWEEN 20 Сахароза Аргінін Бензиловий спирт Хлорид бензалконію Фенол WFI Компоненти кількість/мл р-ЛГл, об’ємн. Na2HPО4 2H2О NaH2PО4 H2О Meтіонін TWEEN 20 Лізин Бензиловий спирт Хлорид бензалконію Фенол WFI SAC/500 BA SAC/500 BACL 25 мкг 25 мкг 1,65 мг 1,65 мг 0,104 мг 0,104 мг 500 мкг 500 мкг 50 мкг 50 мкг 105 мг 105 мг 1,2% 0,30% 0,001% q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл LYS/500/BA SAC/500 Phe ARG/500 BA ARG/500 ARG/500 Phe BACL 25 мкг 25 мкг 25 мкг 25 мкг 1,65 мг 1,65 мг 1,65 мг 1,65 мг 0,104 мг 0,104 мг 0,104 мг 0,104 мг 500 мкг 500 мкг 500 мкг 500 мкг 50 мкг 50 мкг 50 мкг 50 мкг 105 мг 33 мг 33 мг 33 мг 1,2% 0,30% 0,001% 0,50% 0,50% q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл q.s. до 1 мл LYS/500/BACL LYS/500/Phe 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 500 мкг 50 мкг 28 мг 1,2% q.s. до 1 мл 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 500 мкг 50 мкг 28 мг 0,30% 0,001% q.s. до 1 мл 18 25 мкг 1,65 мг 0,104 мг 500 мкг 50 мкг 28 мг 0,50% q.s. до 1 мл UA 101484 C2 5 10 Готують розчини, кожний по 100 мл, фільтрують через мембрану з розміром пор 0,22 мкм і вводять для заповнення в картриджі на 3 мл. Використовують вказану нижче первинну упаковку: - скляні картриджі на 3 мл (Nuova Ompi) з силіконовим покриттям; - гофровані ковпачки з кодами CAP J 3ML L1H075-1-H1В FM 257/2 (Helvoet Pharma); - плунжери з покриттям: Helvoet V9282 FM257/2, з покриттям Omniflex. Картриджі зберігають при температурах 2-8°С, +25°С і +40°С з подальшим аналізом вмісту білка (по ГФ-ВЕРХ), рівня окислених форм (по ЗФ-ВЕРХ), агрегатів (по ГФ-ВЕРХ) і для оцінки утворення субодиниць (кількісно, по методу ГФ-ВЕРХ) протягом періоду часу до 2 місяців. Результати повного набору тестів, проведених на другій сукупності композицій, що досліджуються, наведені в таблицях 20-26. Taблиця 20 Чистота продукту за даними ГФ-ВЕРХ (зберігання при температурі: +40°C) Композиція SAC/500/BA SAC/500/BACL SAC/500/Phe ARG/500/BA ARG/500/BACL ARG/500/Phe LYS/500/BA LYS/500/BACL LYS/500/Phe % гетеродимерів гетеродимерів T=3 дня T=0 100,00 60,01 100,00 67,39 99,66 65,01 99,91 45,63 99,93 44,67 99,93 61,97 99,93 61,71 99,95 61,33 99,93 76,03 % вільних субодиниць % агрегатів T=0 T=3 дня T=0 T=3 дня — — — — — — — — — 39,55 32,34 31,27 54,65 55,33 38,03 38,30 38,68 23,59 — — 0,34 0,10 0,07 0,08 0,08 0,06 0,08 0,44 0,27 3,72 — — — — — 0,39 Taблиця 21 Чистота продукту за даними ГФ-ВЕРХ (зберігання при температурі: +33°C) Композиція SAC/500/BA SAC/500/BACL SAC/500/Phe ARG/500/BA ARG/500/BACL ARG/500/Phe LYS/500/BA LYS/500/BACL LYS/500/Phe % гетеродимерів T=3w T=4w T=8w T=0 100,00 100,00 99,66 99,91 99,93 99,93 99,93 99,95 99,93 76,56 81,49 76,24 71,90 69,08 86,11 83,09 81,03 87,29 71,22 78,95 67,13 71,52 66,86 76,74 76,72 75,21 80,51 59,22 63,53 51,10 61,41 57,22 75,51 67,30 70,20 68,85 15 19 % вільних субодиниць с T=0 T=3w T=4w — — — — — — — — — 22,03 17,26 14,26 27,89 30,67 13,76 16,76 18,88 12,10 26,35 20,10 18,03 27,73 32,94 22,55 22,50 24,64 18,53 % агрегатів T=0 T=3w / / 0,34 0,10 0,07 0,08 0,08 0,06 0,08 1,43 1,26 9,51 0,21 0,26 0,14 0,16 0,09 0,62 UA 101484 C2 Taблиця 22 Чистота продукту за даними ГФ-ВЕРХ (зберігання при температурі: +25°C) Композиція % гетеродимерів T=4w T=8w T=0 100,00 100,00 99,66 99,91 99,93 99,93 99,93 99,95 99,93 SAC/500/BA SAC/500/BACL SAC/500/Phe ARG/500/BA ARG/500/BACL ARG/500/Phe LYS/500/BA LYS/500/BACL LYS/500/Phe 83,85 86,30 79,35 82,32 80,42 84,59 85,04 84,24 85,41 % вільних субодиниць с T=0 T=4w 82,87 85,78 75,26 82,13 80,77 80,95 85,10 86,22 81,22 — — — — — — — — — % агрегатів T=0 — — 0,34 0,10 0,07 0,08 0,08 0,06 0,08 14,69 13,06 13,39 17,39 19,25 15,13 13,78 15,42 13,68 Taблиця 23 % окислених форм за даними ЗФ-ВЕРХ (зберігання при температурі: +33°C) Композиція SAC/500/BA SAC/500/BACL SAC/500/Phe ARG/500/BA ARG/500/BACL ARG/500/Phe LYS/500/BA LYS/500/BACL LYS/500/Phe T=0 1,12 0,90 0,99 0,69 1,13 0,94 1,53 1,60 0,66 T=3 тижні 5,21 5,59 8,28 4,52 4,57 4,60 5,71 4,49 9,66 T=8 тижнів 4,21 4,90 6,01 4,13 3,57 5,24 16,34 5,83 34,97 T=13 тижнів 4,26 4,46 16,14 2,65 2,97 4,82 8,77 5,70 25,51 Taблиця 24 % окислених форм за даними ЗФ-ВЕРХ (зберігання при температурі: +25°C) Композиція SAC/500/BA SAC/500/BACL SAC/500/Phe ARG/500/BA ARG/500/BACL ARG/500/Phe LYS/500/BA LYS/500/BACL LYS/500/Phe T=0 1,12 0,90 0,99 0,69 1,13 0,94 1,53 1,60 0,66 T=4 тижні 2,04 2,10 2,68 1,40 1,46 1,31 2,51 1,96 4,05 T=8 тижнів 2,19 2,31 5,72 1,61 2,31 2,77 3,35 3,14 11,38 T=13 тижнів 2,44 2,23 7,50 1,65 1,89 2,35 4,73 3,47 22,52 Taблиця 25 % окислених форм за даними ЗФ-ВЕРХ Композиція SAC/500/BA SAC/500/BACL SAC/500/Phe ARG/500/BA ARG/500/BACL ARG/500/Phe LYS/500/BA LYS/500/BACL LYS/500/Phe T=0 1,12 0,90 0,99 0,69 1,13 0,94 1,53 1,60 0,66 T=13 тижнів (+5°C) 1,11 1,29 2,51 1,03 1,16 2,02 2,03 1,56 n.a. 5 20 T=0 1,12 0,90 0,99 0,69 1,13 0,94 1,53 1,60 0,66 T=3 дні (+40°C) 1,16 1,25 1,47 0,64 1,06 1,47 1,84 1,58 3,10 UA 101484 C2 Taблиця 26 Вміст р-ЛГл за даними ГФ-ВЕРХ Композиція SAC/500/BA SAC/500/BACL SAC/500/Phe ARG/500/BA ARG/500/BACL ARG/500/Phe LYS/500/BA LYS/500/BACL LYS/500/Phe 5 10 15 20 T=0 20,38 21,73 21,24 22,23 22,38 21,34 20,33 23,83 21,34 T=3 дні (+40°C) 21,70 22,06 21,49 18,86 21,48 22,38 20,93 21,78 21,05 T=3 тиж. (+33°C) 21,05 21,31 21,02 19,52 21,71 20,60 18,85 20,68 20,20 T=4тиж. (+33°C) 22,54 22,64 22,53 24,64 23,52 23,09 22,10 23,44 21,89 T=8 тиж. (+33°C) 16,47 18,77 20,71 16,14 16,86 16,99 14,93 15,50 16,50 T=4 тиж. (+25°C) 23,70 23,65 22,66 25,26 24,18 24,41 24,24 24,07 22,99 T=8 тиж. (+25°C) 18,43 18,10 17,23 17,69 19,34 16,32 17,36 18,60 16,56 Одержані результати підтвердили сумісність стабілізуючих засобів з підвищеною кількістю метіоніну (див. приклад 1). Додатково, ці результати показали, що бактеріостатичні речовини сумісні з метіоніном в кількості 500 мкг/мл. Приклад 5 - Сумісність багатодозових рідких композицій р-ЛГл з багатодозовою рідкою композицією ФСГ На основі результатів, описаних в прикладі 4, проводили змішування композицій р-ЛГл в картриджах на 3 мл з композицією ФСГ (наприклад, з багатодозовою рідкою композицією GonalF®) і далі тестували їх після 24-годинного контакту при температурі 25°С з використанням наведених нижче методик: - ГФ-ВЕРХ для оцінки чистоти; - ЗФ-ВЕРХ для визначення титру р-ФСГл і р-ЛГл; - ЗФ-ВЕРХ для визначення окислених форм α-субодиниці р-ФСГл і р-ЛГл; - біотест in vivo для визначення р-ФСГл і р-ЛГл; - SDS-PAGE для кількісного визначення вільних субодиниць і агрегатів р-ФСГл і р-ЛГл (дані не наведені), - вимірювання pH розчину; - візуальна оцінка. Одержані результати представлені в таблицях 27-29. Taблиця 27 Чистота продукту за даними ГФ-ВЕРХ Композиція SAC/500/BA SAC/500/BACL SAC/500/Phe ARG/500/BA ARG/500/BACL ARG/500/Phe LYS/500/BA LYS/500/BACL LYS/500/Phe % гетеродимерів T=24h T=0 98,28 98,41 98,85 99,66 98,18 97,68 98,31 98,61 97,68 98,52 97,89 97,73 97,35 97,51 97,97 98,82 98,29 98,40 21 T=0 0,30 0,00 0,27 0,28 0,33 0,44 0,38 0,28 0,37 % агрегатів T=24h 1,09 0,43 0,54 0,98 0,53 0,77 1,09 0,81 1,01 UA 101484 C2 Taблиця 28 Вміст ФСГ і LH Композиція SAC/500/BACL SAC/500/Phe ARG/500/BA ARG/500/BACL ARG/500/Phe LYS/500/BA LYS/500/BACL LYS/500/Phe Вміст р-ФСГл* T=0 T=24 h 29,50 31,15 30,88 31,28 30,46 31,00 32,23 32,84 30,07 31,06 30,91 32,11 28,57 31,66 28,75 31,25 Вміст р-ЛГл # T=0 T=24 h 7,20 8,31 7,34 7,54 8,02 8,44 7,12 7,40 7,78 8,05 6,88 7,25 6,64 7,62 6,80 7,47 * Розрахункова кількість ФСГ: 200 МО=30,96 мкг/мл; # Розрахункова кількість ЛГl: 100 МО=8 мкг/мл Taблиця 29 Біотестування Композиція SAC/500/BACL ARG/500/Phe 5 10 15 20 25 30 Активність р-ФСГл T=24 h T=0 365,7 355,0 387,5 393,0 Активність р-ЛГл T=0 T=24 h 227,0 231,4 212,7 243,0 Всі досліджені багатодозові композиції сумісні з багатодозовою композицією Gonal-F®, оскільки відмічається: - відсутність втрат у вмісті ФСГ і LH; - відсутність окислення; - відсутність агрегації (за даними ГФ-ВЕРХ); - відсутність утворення агрегатів і субодиниць, за даними SDS-PAGE; - відсутність втрат в біологічній активності LH і ФСГ. Приклад 6 - Сумісність з первинною упаковкою Для тестування сумісності між композиціями р-ЛГл і контейнерами для готової продукції (шприци і картриджі), провели дослідження матриці для оцінки наступних параметрів: - ефект концентрації р-ЛГл: 6 мкг/мл, 12 мкг/мл, 24 мкг/мл; - ефект об'єму, що заповнюється в контейнері: 0,25 мл, 0,5 мл, 1 мл; - вплив типу контейнера: скляний шприц на 1 мл і скляний картридж на 3 мл; - ефект бактеріостатичної речовини: композиції, одержують з використанням і без використання бактеріостатиків і зберігають в картриджах об'ємом 3 мл. Одну композицію (SAC/500/BACL) одержали з різною активністю р-ЛГл і ввели в контейнери, додержуючи різні об'єми заповнення. Провели якісну оцінку партій продукту в рамках ГФ-ВЕРХ протягом періоду часу до 1 тижня при температурі +33°С. Результати проілюстровані на фіг. 1(A-F). На фіг. 2 (A-B) проілюстроване порівняння процентного вмісту гетеродимерів, за даними аналізу композиції методом ГФ-ВЕРХ, в композиції при додаванні і без додавання бактеріостатичних речовин. Результати, наведені на фіг. 1 і 2, дозволяють зробити наступні висновки: - не відмічається впливу контейнера на композиції, у разі концентрацій 12 мкг/мл і 24 мкг/мл; - не відмічається впливу об'єму, що заповнюється, на композиції, у разі концентрацій 12 мкг/мл і 24 мкг/мл; - відмічається позитивний ефект підвищеної концентрації на дисоціацію субодиниць; - не відмічається відмінностей між партіями, що містять і не містять бактеріостатики; - більш висока стабільність асоціюється з більш високою концентрацією р-ЛГл. Приклад 7 - Дослідження стабільності багатодозових рідких композицій На основі результатів, описаних в попередніх прикладах, вибрали чотири композиції, описані в таблиці 19 (SAC/500/BACL, LYS/500/BA, LYS/500/BACL і ARG/500/Phe), які помістили 22 UA 101484 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 на зберігання при температурах 2-8°С і +25°С і протестували в жорстких умовах оцінки стабільності, з використанням в програмі тестування наступних методів: ЗФ-ВЕРХ для оцінки вмісту LH; ЗФ-ВЕРХ для визначення рівня окислених форм α-субодиниць; - ЗФ-ВЕРХ для визначення вмісту фенолу; - ЗФ-ВЕРХ для визначення вмісту хлориду бензалконію; - ЗФ-ВЕРХ для визначення вмісту бензилового спирту; - SDS-PAGE для визначення вмісту вільних субодиниць і агрегатів; - біотестування; - вимірювання pH розчину; - візуальний огляд. Кількість лізину і аргініну у вказаних вище композиціях відкоректували (зокрема, довели вміст моногідрохлориду L-лізину до 28,5 мг і моногідрохлориду L-аргініну до 31,5 мг) для оптимізації ізотонічних властивостей композиції. Провели статистичний аналіз результатів, одержаних по всіх параметрах, які були ідентифіковані як такі, що вказують на стабільність, з використанням для аналізу програмного забезпечення Stabileo 1.1. Концентрація р-ЛГл (за даними ЗФ-ВЕРХ) при зберіганні в умовах температур 2-8°С і 25±2°С У композиціях не спостерігалося статистично значущих втрат в концентрації білка після 12місячного зберігання при температурі 2-8°С. Звичайно зниження, що спостерігається після 6місячного зберігання при температурі 25±2°С, становило 0,4 мкг/мл. Біологічна активність р-ЛГл (за даними біотесту) при зберіганні в умовах температур 2-8°С і 25±2°С Не відмічалося релевантної втрати в біологічній активності композицій після 12-місячного зберігання при температурах 2-8°С і 25±2°С. % субодиниць і агрегатів за даними SDS-PAGE Процентний вміст агрегатів, за даними SDS-PAGE, залишається нижчим за 2% для всіх композицій після їх 12-місячного зберігання при температурах 2-8°С і 25°С. Процентний вміст субодиниць, за даними SDS-PAGE, зростає понад 32% для всіх композицій після їх 6-місячного зберігання при температурі 25°С. % окислених форм, за даними ЗФ-ВЕРХ У композиціях SAC/500/BACL і ARG/500/Phe відмічається знижений рівень утворення окислених форм. Величина pH і візуальний огляд Не відмічалося змін ні у зовнішньому вигляді композицій (колір, прозорість, видимі частинки), ні по величині pH, як в ході виробництва, так і при зберіганні. Вміст бактеріостатичних речовин Оцінювали цільові кількості фенолу і бензилового спирту і не було виявлено втрат при вимірюванні в точках від 6-місяців до 12-місяців. Кількість хлориду бензалконію нижче цільового значення (6 мкг/мл, а не 10 мкг/мл) була виявлена в композиції SAC/500/BACL в точці оцінки 6 місяців. Ефективність бактеріостатичних речовин Результати тестів за оцінкою бактеріостатичної ефективності, проведені в Т=0, з повтором аналізу в точці 9 місяців, показані в таблицях 30-33. 45 Taблиця 30 Результати тестування бактеріостатичної ефективності багатодозової композиції SAC/500/BACL Log зниження проти T=0 T=24 год. T=7 днів T=14 днів Mікроорганізм Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli Candida albicans T=6 год. >3 >3 Не дослідж. Не дослідж. >3 >3 Не исслед. Не исслед. >3 >3 >3 >3 >3 >3 >3 >3 Aspergillus niger Не дослідж. Не исслед. 1,8 >3 23 T=28 днів Немає зниження Немає зниження Немає зниження Немає підвищення Немає підвищення UA 101484 C2 Taблиця 31 Результати тестування бактеріостатичної ефективності багатодозової композиції LYS/500/BACL Log зниження проти T=0 Т=24 год. T=7 днів Т=14 днів Mікроорганізм T=6 год. >3 >3 >3 >3 >3 >3 >3 >3 Не дослідж. Не дослідж. >3 >3 Candida albicans Не дослідж. Не дослідж. >3 >3 Aspergillus niger Не дослідж. Не дослідж. 3,3 >3 Staphylococcus aureus Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli Т=28 днів Немає зниження Немає зниження Немає зниження Немає підвищення Немає підвищення Taблиця 32 Результати тестування бактеріостатичної ефективності багатодозової композиції LYS/500/BA Log зниження проти T=0 Mікроорганізм T=6 год. Staphylococcus aureus T=24 год. Т=7 днів T=14 днів T=28 днів 1,05 >3 >3 >3 >3 >3 >3 >3 Немає зниження Немає зниження Немає зниження Немає підвищення Немає підвищення Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli Не дослідж. Не дослідж. >3 >3 Candida albicans Не дослідж. Не дослідж. >3 >3 Aspergillus niger Не дослідж. Не дослідж. >3 >3 Taблиця 33 Результати тестування бактеріостатичної ефективності багатодозової композиції ARG/500/Phe Мікроорганізм Staphylococcus aureus Log зниження проти T=0 T=24 год. T=7 днів T=14 днів T=6 год. 0,73 >3 >3 >3 Pseudomonas aeruginosa Escherichia coli >3 >3 >3 Не дослідж. Не дослідж. >3 >3 Candida albicans Не дослідж. Не дослідж. >3 >3 Aspergillus niger 5 >3 Не дослідж. Не дослідж. >3 >3 T=28 днів Немає зниження Немає зниження Немає зниження Немає підвищення Немає підвищення Композиції, що містять поєднання 0,3% бензилового спирту + 0,001% хлориду бензалконію і сахарозу або лізин (SAC/500/BACL і LYS/500/BACL), відповідали критерію А Європейської Фармакопеї, навіть якщо кількість хлориду бензалконію була нижче цільового значення (6 мкг/мл замість 10 мкг/мл). Композиція, що містить 0,5% фенолу (ARG/500/Phe), і композиція, що 24 UA 101484 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 містить 1,2% бензилового спирту (LYS/500/BA), відповідали критерію В Європейської Фармакопеї. Заключення Всі багатодозові композиції продемонстрували хороший профіль стабільності після 12місячного зберігання при температурах 2-8°С. Список цитованої літератури Burgues et al.; Subcutaneous self-administration of highly purified follicle stimulating hormone and human chorionic gonadotrophin for the treatment of male 5 hypogonadotrophic hypogonadism. Spanish Collaborative Group on Male Hypogonadotrophic Hypogonadism; Hum. Reprod.; 1997, 12(5): 980-6 Cerpa-Poljak et al.; Isoelectric charge of recombinant human follicle-stimulating hormone isoforms determines receptor affinity and in vitro bioactivity; Endocrinology; 1993, 132(1): 351-356. Dias et al.; Receptor binding and functional properties of chimeric human follitropin prepared by an exchange between а small hydrophilic intercysteine loop of human follitropin and human lutropin; J. Biol. Chem.; 1994, 269(41): 25289-25294. Fiddes & Talmadge; Structure, expression, and evolution of the genes for the human glycoprotein hormones; Recent Prog. Horm. Res.; 1984, 40: 43-78. Flack et al.; Site-directed mutagenesis defines the individual roles of the glycosylation sites on follicle-stimulating hormone; J. Biol. Chem.; 1994, 269(19): 14015-14020. Hakola et al.; Recombinant rat follicle-stimulating hormone; production by Chinese hamster ovary cells, purification and functional characterization; Molecular and 20 Cellular Endocrinology, 1997, 127(1): 59-69. Keene et al.; Expression of biologically active human follitropin in Chinese hamster ovary cells; J. Biol. Chem.; 1989, 264(9): 4769-4775. Keutmann et al.; Structure of human luteinizing hormone beta subunit: evidence for related carboxyl-terminal sequence among certain peptide hormones; Biochem. Biophys. Res. Commun.; 1979, 90(3): 842-848. Klein et al.; Pharmacokinetics and pharmacodynamics of single-chain recombinant human folliclestimulating hormone containing the human chorionic gonadotrophin carboxyterminal peptide in the rhesus monkey; Fertility & Sterility; 2002, 77(6): 1248-1255. Klein et al.; Development and characterization of а long-acting recombinant hFSH agonist; Human Reprod.; 2003, 18(1): 50-56. LaPolt et al.; Enhanced stimulation of follicle maturation and ovulatory potential by long acting follicle-stimulating hormone agonists with extended carboxyl-terminal peptides; Endocrinology; 1992, 131(6): 2514-2520. Reichert & Ramsey; Dissociation of human follicle-stimulating hormone. Comparison with luteinizing hormone; J. Biol. Chem.; 1975, 250(8): 3034-3040. Shome et al.; Human follicle stimulating hormone: first proposal for the amino acid sequence of the hormone-specific, beta subunit (hFSHb); J. Clin. Endocrinol. Metab., 1974;39(4):203-205. Shome, et al.; А reevaluation of the amino acid sequence of human follitropin beta-subunit; J. Prot. Chem.; 1988, 7(4): 325-339. Steelman et al.; Assay of the follicle stimulating hormone based on the augmentation with human chorionic gonadotrophin; Endocrinology; 1953, 53(6): 604-616. Talmadge et al.; Evolution of the genes for the beta subunits of human chorionic gonadotropin and luteinizing hormone; Nature; 1984, 307: 37-40. Valove et al.; Receptor binding and signal transduction are dissociable functions requiring different sites on follicle-stimulating hormone; Endocrinology; 1994, 135(6): 2657-2661. Van Hell et al.; Effects of human menopausal gonadotrophin preparations in different 5 bioassay methods; Acta Endocrinologica; 1964, 47: 409-418. EP0 211 894 EP 0 448 146 EP 0 487 512 EP 0 505 500 10 EP 0 618 808 EP 0 814 841 EP 0 853 945 WO 85/01958 WO 98/58957 15 WO 00/04913 WO 01/58493 WO 2004/087213 WO 2004/105788 25 UA 101484 C2 WO 2004/112826 20 US 3119740 US 5767067 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 1. Рідка композиція, що містить лютеїнізуючий гормон (LH) або його варіант, яка відрізняється тим, що вказана композиція включає фосфатний буфер і стабілізуючу кількість аргініну або його солей в концентрації від 10 до 50 мг/мл і/або лізину або його солей в концентрації від 10 до 50 мг/мл. 2. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що вказаний лютеїнізуючий гормон (LH) являє собою лютеїнізуючий гормон людини (ЛГл). 3. Композиція за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що вказаний лютеїнізуючий гормон (LH) являє собою рекомбінантний лютеїнізуючий гормон людини (р-ЛГл). 4. Композиція за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що вказаний лютеїнізуючий гормон (LH) являє собою лютеїнізуючий гормон з сечі людини (с-ЛГл). 5. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка відрізняється тим, що вказаний лютеїнізуючий гормон (LH) присутній в концентрації, що складає від точно або приблизно 1 до точно або приблизно 50 мг/мл. 6. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, де вказаний фосфатний буфер присутній в концентрації, що складає від 1 до 100 мМ. 7. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, де вказаний фосфатний буфер являє собою переважно натрій-фосфатний буфер. 8. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, що включає також поверхнево-активну речовину. 9. Композиція за п. 8, яка відрізняється тим, що вказана поверхнево-активна речовина являє собою полісорбат 20. 10. Композиція за п. 9, яка відрізняється тим, що вказаний полісорбат 20 присутній в концентрації, що складає від 0,01 до 10 мг/мл. 11. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка додатково містить також метіонін. 12. Композиція за п. 11, де метіонін присутній в концентрації, що складає від 0,01 до 5,0 мг/мл. 13. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка додатково містить бактеріостатичну речовину. 14. Композиція за п. 13, яка відрізняється тим, що вказана бактеріостатична речовина вибрана з групи, що складається з бензилового спирту, фенолу і поєднання бензилового спирту і хлориду бензалконію. 15. Композиція за п. 13 або 14, яка відрізняється тим, що вказана бактеріостатична речовина присутня в концентрації, що складає від 0,005 до 15 мг/мл. 16. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка додатково містить воду для ін'єкцій. 17. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, що має рН в діапазоні значень від 7,5 до 8,5. 18. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, що включає щонайменше 25 мкг/мл р-ЛГл, 1,65 мг/мл Na2HPO4·2H2O, 0,104 мг/мл NaH2PO4·H2O, 31,5 мг/мл моногідрохлориду L-аргініну, 0,05 мг/мл полісорбату 20, 0,5 мг/мл метіоніну і 5 мг/мл фенолу. 19. Композиція за будь-яким з пп. 1-17, що включає щонайменше 25 мкг/мл р-ЛГл, 1,65 мг/мл Na2HPO4·2H2O, 0,104 мг/мл NaH2PO4·H2O, 28,5 мг/мл моногідрохлориду лізину, 0,05 мг/мл полісорбату 20, 0,5 мг/мл метіоніну і 12 мг/мл бензилового спирту. 20. Композиція за будь-яким з пп. 1-17, що включає щонайменше 25 мкг/мл р-ЛГл, 1,65 мг/мл Na2HPO4·2H2O, 0,104 мг/мл NaH2PO4·H2O, 28,5 мг/мл моногідрохлориду лізину, 0,05 мг/мл полісорбату 20, 0,05 мг/мл метіоніну, 3 мг/мл бензилового спирту і 0,01 мг/мл хлориду бензалконію. 21. Фармацевтичний лікарський засіб, який включає композицію за будь-яким з пп. 1-20. 22. Контейнер, який містить фармацевтичний лікарський засіб за п. 21. 23. Спосіб одержання композиції за будь-яким з пп. 1-20, що включає розбавлення лютеїнізуючого гормону (LH) розчином ексципієнтів. 24. Застосування композиції за будь-яким з пп. 1-20 для одержання лікарського засобу. 25. Застосування композиції за будь-яким з пп. 1-20 при одержанні лікарського засобу для лікування інфертильності у жінок і/або чоловіків. 26. Застосування композиції за будь-яким з пп. 1-20 в поєднанні з рідкою композицією, що включає фолікулостимулюючий гормон (ФСГ) або його варіант. 27. Композиція за будь-яким з пп. 1-20 для лікування інфертильності у жінок і/або чоловіків. 26 UA 101484 C2 27 UA 101484 C2 28

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Lh liquid formulations

Автори англійською

Agostinetto Rita, Samaritani, Fabrizio, Del Rio, Alessandra, Richard, Joel

Назва патенту російською

Жидкие композиции lh

Автори російською

Агостинетто Рита, Самаритани Фабрицио, Дель Рио Алессандра, Ришар Жоэль

МПК / Мітки

МПК: A61P 5/06, A61K 31/198, A61K 9/08, A61K 38/24, A61K 31/197

Мітки: рідкі, композиції

Код посилання

<a href="http://uapatents.com/32-101484-ridki-kompozici-lh.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Рідкі композиції lh</a>

Подібні патенти