Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Среда для разбавления и замораживания спермы быков, содержащая дисахарид, глицерин, желток куриных яиц и биологически активный препарат, отличающаяся тем, что в качестве био­логически активного препарата она содержит эхинацею пурпурную, а дисахарида - сахарозу или лактозу при следующем соотношении компонен­тов

(мас.%):

сахароза или лактоза                                   8,0-10,0

глицерин                                                      4,0-5,0

желток куриных яиц                                    15,0-20,0

эхинацея пурпурная                                                0,5-2,0

вода дистиллированная остальное                        до 100,0.

Текст

Изобретение относится к искусственному осеменению сельскохозяйственных животных, а именно к защитным средам для разбавления и криоконсервации спермы животных и может быть использовано на племпредприятиях. В настоящее время криоконсервация спермы имеет широкую практическую реализацию благодаря наличию целого ряда законченных технологий. Для повышения устойчивости клеток к криоповреждающим факторам используют специальные синтетические среды, создающие оптимальные условия для их криоконсервации. Известна среда для разбавления и замораживания спермы быков, содержащая помимо основных общеизвестных компонентов (лактоза, глицерин, желток) вещества ингибирующие окислительные процессы в сперме (т. е. обладающие биологически активными средствами) - сорбит или тиосульфат натрия. Компоненты этой среды не дефицитны, среда удобна в практическом применении и обладает удовлетворительными криофилактическими свойствами для спермы высокой морозоустойчивости. Существенным недостатком известной среды является: - незначительное повышение криорезистентности замораживаемой спермы, вследствие чего невозможно решить проблему замораживания спермы быков пониженного качества (не соответствующей существующим ГОСТам), т. е. решить проблему производственного брака спермопродукции; - незначительное повышение оплодотворяющей способности спермы в сравнении с существующими. В основу изобретения поставлена задача создать дешевую, доступн ую для широкого применения в практике среду для разбавления и замораживание спермы быков, которая благодаря использованию ее в качестве криоконсерванта, обладающего восстанавливающим (корректирующим) действием на морозоустойчивость спермы пониженного качества, обеспечивала бы снижение производственного брака спермопродукции и повышение ее оплодотворяющей способности. Поставленная задача решается тем, что среда для разбавления и замораживания спермы быков, содержащая дисахарид (лактоза или сахароза), глицерин, желток куриных яиц и биологически активный препарат, согласно изобретению, в качестве биологически активного вещества содержит препарат лекарственного растения - эхинацею пурпурную (Echinacea purpurea Moench) при следующем соотношении компонентов, мас.%: Заявляемую среду готовят следующим образом: дисахарид, сухую измельченную наземную часть или корень эхинацеи пурпурной и воду дистиллированную, взятые в количествах, указанных в составе, выдерживают в водяной бане в течение 15 минут, охлаждают и фильтруют через стерильную марлю. К фильтрату добавляют глицерин и желток куриных яиц. Эхинацея пурпурная или рудбекия пурпурная (Echinacea purpurea Moench) - многолетнее лекарственное растение из Северной Америки, в последние годы широко культивируется на Украине. Она содержит полисахариды, фенольные соединения, эфирное масло, фитостеролы, жирные кислоты, широкий спектр макро- и микроэлементов, т. е. по своему составу это целая композиция биологически активных веществ [Дудченко Л. Г. и др. Фито химическое исследование и фармакологические свойства видов рода эхинацеи/ /Тезисы докл. Ill Украинской конференции по медицинской ботанике. - К. 1992, с. 52-53]. В настоящее время хорошо изучены ее биологические свойства на организменном уровне. Известно, что эхинацея пурпурная является сильным активатором макрофагов, гранулоцитов и лимфоцитов, повышает резистентность организма, иммунитет и относится, таким образом, к растительным стимуляторам иммунной системы [Моисеева Г. Ф., Беликов В. Г. Иммуностимулирующие полисахариды высших растений. - Фармация, 1992, №3, с.79-84]. Препараты эхинацеи обладают противоаллергическими свойствами, мягко стимулируют центральную нервную систему [Авторское свидетельство СССР №1731207, кл.А61Д19/02, 1992]. Механизм действия препаратов эхинацеи на клеточном уровне не изучен. Предполагается, что биологически активные вещества эхинацеи пурпурной в составе криоконсерванта оказывают стабилизирующее действие на мембранные структуры спермиев, снижают перекисное окисление их липидов, в результате че го повышается устойчивость клеток к криоповреждающим факторам. Исследование проводили на сперме быков-производителей, принадлежащих Киевскому племпредприятию. Для получения, оценки и дальнейшей криообработки использовали методы, заложенные в технологическую схему племпредприятий и обусловленные действующей Инструкцией [Инструкция по организации и технологии работы станций и предприятий по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных. - М. Колос, 1981]. Нативную и заморожено-оттаянную сперму оценивали методом корреляционной доплеровской спектроскопии на лазерном анализаторе качества спермы (Авторское свидетельство СССР №1731207, кл. А61D19/02, 1992). При этом оценивали такие показатели как подвижность спермиев (М, баллы), линейную скорость их движения (V, мкм/с), энергию (Е, усл.ед.) и специальные тесты для определения криорезистентности: по результатам замораживания - тест криорезистентности (КРТэ); прогнозирующий тест тест осмотической устойчивости скорости спермиев (OCTv). В исследованиях использовали эякуляты пониженного качества, которые в соответствии с действующим ГОСТом 23745-79 должны выбраковываться: I опыт - сперма среднего качества: М=6-7,5 балов, V=65-75мкм/с, Е=35-60ед, OCTv=37; ІІ опыт - сперма низкого качества: M=5-6 балов, V=55-65мкм/с, E=25-35ед., OCTv=20-37. Каждый полученный эякулят после оценки делили на разные части и соответственно разбавляли известной средой (прототип), а также заявляемыми средами. Сперму охлаждали 4-5ч и замораживали в парах азота. Хранили замороженные спермодозы в жидком азоте. В качестве прототипа использовали среду следующего состава, мас.%: Пpимеp 1. Опыт проводили на 23 эякулятах пониженного качества. В опыте использовали помимо известной среды (прототип) заявляемые среды следующего состава, мас.%: Среды для криоконсервации готовили следующим образом: навески лактозы и измельченной высушенной наземной части эхинацеи пурпурной заливали дистиллированной водой и выдерживали в кипящей водяной бане 15 минут, затем охлаждали, фильтровали и добавляли остальные компоненты. Каждый из эякулятов делили на 5 частей, разбавляли соответствующей средой и замораживали. Результаты замораживания в известной и заявляемых средах представлены в табл. 1. Данные табл. 1 свидетельствуют, что заявляемые среды хорошо защищают сперму при замораживании. Оптимальный состав из всех исследуемых сред оказался у сред №2 и №3. При их использовании криорезистентность составила свыше 47%, подвижность оттаянной спермы превышала контрольные величины (прототип) на 12,4%, выживаемость - на 37-45% при статистически значимой разнице. Состав №4 был наименее эффективным, результаты замораживания оказались на уровне контроля. Пример 2. В опыте использовали 12 эякулятов быков-производителей низкого качества. Каждый эякулят делили на 5 частей и соответственно разбавляли известной средой (прототип) или заявляемыми средами следующего состава, мас.%: Сахароза Глицерин Желток куриных яиц Корень эхинацеи пурпурной Вода дистиллированная остальное №1 10 5,0 10 0,1 №2 9,0 4,5 15 0,5 №3 8,5 4,0 15 1,0 №4 7,5 4,0 20 2,0 до 100 мл Результаты замораживания представлены в табл. 2 Сперма, замороженная с использованием известной среды после оттаивания имела очень низкие показатели, которые не соответствовали требованиям действующего ГОСТа 26030-83 и практически на племпредприятиях такая сперма выбрасывается. Сперма, замороженная в заявляемых средах состава №2,3 и 4 успешно перенесла замораживание и после оттаивания соответствовала всем требования ГОСТа Пример 3. Для проверки оплодотворяющей способности сперма быков была заморожена в известной и заявляемой среде (разделенный эякуляты). Оплодотворяющую способность оценивали на телках совхозов "Гоголевский" и "Красиловский" Броварского района Киевской области. Исследование проведено на 200 телках. Оплодотворяющая способность спермы, замороженной в заявляемой среде, составила 80,5%, что на 15,2% превышало прототип. Приведенные в примерах результаты свидетельствуют о более высокой биологической полноценности спермы при применении заявляемой среды в сравнении со средой, избранной в качестве прототипа. Это проявляется в следующем: - в более высокой подвижности спермиев на 12-17% (табл. 1 и 2), что свидетельствует о большей сохранности жизнеспособных клеток, при криоконсервации; разница статистически значима (р

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Medium for dilution and freezing sperm of bulls

Автори англійською

Burkat Valerii Petrovych, Behma Liudmyla Oleksiivna, Behma Anatolii Andriiovych, Tkachuk Svitlana Serhiivna, Ivanchenko Mykola Ivanovych

Назва патенту російською

Средадля разбавления и замораживания спермы быков

Автори російською

Буркат Валерий Петрович, Бегма Людмила Алексеевна, Бегма Анатолий Андреевич, Ткачук Светлана Сергеевна, Иванченко Николай Иванович

МПК / Мітки

МПК: A61D 19/02

Мітки: заморожування, сперми, середовище, розбавлення, бугаїв

Код посилання

<a href="http://uapatents.com/3-10894-seredovishhe-dlya-rozbavlennya-i-zamorozhuvannya-spermi-bugav.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Середовище для розбавлення і заморожування сперми бугаїв</a>

Подібні патенти